蝗绿僵菌双特异性磷酸酶基因MaCdc14的克隆及功能研究

发布时间：2024-02-29 05:53

　　绿僵菌(Metarhizium spp.)是一类重要的昆虫病原真菌,由于其安全、对环境友好等特性而被广泛研究。其中,蝗绿僵菌(Metarhizium acridum)是一种特异侵染蝗虫的昆虫病原真菌,是研究一系列关于生态学、进化论及物种形成机制等问题的模式生物,具有极大的生防潜力。目前,这类生物制剂已应用于澳大利亚、非洲及亚洲等国家和地区,然而其易受环境影响和功效差等缺点严重阻碍了它在农业中的应用。因此,在分子层面上研究昆虫病原真菌对害虫的有效防治具有重要意义。在真核生物中,蛋白激酶和磷酸酶调控的磷酸化和去磷酸化作用起着十分重要的作用。在本研究中,我们研究了一个双特异性磷酸酶基因MaCdc14。经过生物信息学分析,显示该基因全长1963 bp,含有一段103 bp的内含子序列,可编码含619个氨基酸的蛋白。该蛋白分子量为69.11 kDa,等电点为9.29,不含信号肽。通过同源比对,发现该基因在真菌中高度保守。为了研究该基因在蝗绿僵菌中的功能,分别利用同源重组和随机插入的方法构建了MaCdc14的敲除菌株(ΔMaCdc14)及回复菌株(CP)。结果发现,MaCdc14缺失后分支数和菌丝...

【文章页数】：101 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图2.1蝗绿僵菌中MaCdc14的特征

2蝗绿僵菌MaCdc14的功能研究31经在线网站http://www.cbs.dtu.dk/services/signalP预测，该蛋白不含信号肽。通过保守结构域预测（https://www.ncbi.nlm.nih.gov/Structure/cdd/wrpsb.cgi），该蛋....

图2.2在蝗绿僵菌中MaCdc14敲除与回复菌株的构建（a）MaCdc14敲除与回复载体构建的示意图

重庆大学硕士学位论文32理构建了该基因的敲除及回复载体（图2.2a）。分别设计该基因左、右臂引物LF/LR和RF/RR，用PCR扩增左右臂片段，并将其连接到pK2-PB载体上，并用左臂上游引物LF（或载体上设计的引物VF）和在筛选标记上设计的引物PR验证左臂是否成功连接，同样，用....

图2.3核分裂，隔的形成及菌丝分支数（a）用CFW对几丁质进行染色，荧光显微镜观察

2蝗绿僵菌MaCdc14的功能研究33失后都可以引起细胞分裂的异常，如酿酒酵母、球孢白僵菌、禾谷镰刀菌和稻瘟病菌等[88,91-93]。因此，首先探究MaCdc14在蝗绿僵菌中是否也可以影响细胞分裂。图2.3核分裂，隔的形成及菌丝分支数（a）用CFW对几丁质进行染色，荧光显微镜观....

图2.4产孢过程及产孢量测定（a）各菌株在18h，26h和36h的菌丝形态

2蝗绿僵菌MaCdc14的功能研究35均上调表达。以上结果表明MaCdc14在产孢过程中发挥着重要的调控作用。图2.4产孢过程及产孢量测定（a）各菌株在18h，26h和36h的菌丝形态。箭头:产孢结构上的的分生孢子。Bar=10μm。（b）不同菌株在1/4SDAY培养3、5、7、....

本文编号：3914597