水稻OsRZFP34基因逆境表达特征及其启动子的克隆与分析

发布时间：2024-03-23 04:41

　　采用qRT–PCR技术分析水稻OsRZFP34在高温(42℃)、低温(4℃)、10%聚乙二醇(PEG)6000模拟干旱、高盐(100 mmol/L NaCl)和脱落酸(ABA)处理(100μmol/L)下的表达模式;克隆OsRZFP34基因启动子,并利用在线软件New PLACE和PlantCARE对其序列进行顺式作用元件分析;构建OsRZFP34pro::GUS表达载体并转化水稻;通过组织化学染色和GUS酶活性检测,分析在不同胁迫处理条件下OsRZFP34启动子驱动GUS基因表达的活性。qRT–PCR分析结果表明,上述5种处理均能不同程度地诱导OsRZFP34的表达,其中高温胁迫对其表达的诱导程度最强,而ABA对其表达只有微弱的诱导。顺式作用元件分析结果表明,该启动子上包含有多个与逆境响应、激素响应以及Ca²⁺信号转导相关元件。GUS组织化学染色和荧光分析结果显示,OsRZFP34基因启动子的活性受到高温、低温、PEG、盐和ABA的调控,表明该启动子是受多种逆境诱导的诱导型启动子。

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【部分图文】：

图1OsRZFP34pro::GUS植物表达载体构建示意结果

利用EasyGeno快速重组克隆试剂盒将回收的PCR产物与经KpnⅠ和NcoⅠ线性化的pCAMBIA–1305.1载体进行基因重组，用OsRZFP34启动子替换35S启动子，构建OsRZFP34pro::GUS植物表达载体(图1)。重组子分别用KpnⅠ+BglⅡ和KpnⅠ....

图2OsRZFP34在水稻不同组织和不同胁迫处理下的相对表达量

利用qRT–PCR检测了OsRZFP34受不同胁迫处理诱导表达的情况。结果显示，高温(42℃)、低温(4℃)、模拟干旱(10%PEG6000)、高盐(100mmol/LNaCl)和ABA(100μmol/L)处理均能不同程度地诱导OsRZFP34的表达，其中，高温胁迫....

图3OsRZFP34启动子扩增及重组载体酶切检测结果

以水稻基因组DNA为模板，OsRZFP34–PF/R为引物，进行PCR扩增。电泳结果显示，在接近2000bp区域出现单一清晰条带，大小与预期一致(图3–A)。采用无缝重组试剂盒(EasyGeno)将纯化的目的片段连接到植物表达载体pCAMBIA–1305.1上。重组质....

图4OsRZFP34pro::GUS转基因水稻不同组织的GUS染色结果

取非胁迫条件下生长的OsRZFP34pro::GUS转基因水稻的根、茎、叶片、叶枕、颖花和种子进行GUS组织化学染色，结果(图4–G、H、I、J、K、L)显示，只在叶片和叶枕部能够观察到微弱的蓝色，说明在非胁迫条件下OsRZFP34启动子活性很弱，在大多数组织中不表达。此结果....

本文编号：3935475