利用烟曲霉T-DNA插入突变体库筛选及验证生长繁殖相关基因功能

发布时间：2024-04-03 00:12

　　烟曲霉是一种重要的条件致病真菌,发病率仅次于白假丝酵母,位于深部真菌感染第二位。一般来说,烟曲霉感染人体时主要是以孢子的形式沿呼吸道进入肺泡,在肺泡表面存活、定植、萌发,最终向下侵袭生长入血,引起系统性真菌感染。利用T-DNA及转座子等技术插入染色体DNA,获得插入突变体的反向遗传学方法,是研究植物、真菌等生物基因功能的一种重要方法。本实验室前期工作中已建立了烟曲霉T-DNA插入突变体库,用于烟曲霉基因功能的研究。本研究的主要目的是寻找与烟曲霉生长繁殖相关的基因,并研究其与烟曲霉致病力的关系。经筛选获得形态改变突变体54株,其中3株表型变化明显。在研究过程中,确定突变体插入位点,明确破坏基因是其关键技术之一。然而,现有的方法存在操作复杂,需要限制性内切酶酶切及T-A克隆连接等技术的辅助,阳性率低,有非特异性扩增,耗时长,成本高等缺点。本研究结合降落PCR、热不对称PCR及抑制PCR技术,建立了一种新型高通量的插入位点分析方法。该方法阳性率高,操作简便快捷,节省时间、人力及物力。获得的侧翼序列长度在300-2500bp之间,可满足插入位点的生物信息学分析,为高通量分析插入位点提供技术支撑...

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图1.1烟曲霉形态模式图

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图2.1部分突变体hph基因扩增结果

15图2.1部分突变体hph基因扩增结果Figure2.1PartialmutantshphgeneamplificationresultsDL2000DNAMarker；pBHT1为阳性对照；None为阴性对照；其余泳道为不同突变体2.3.3形态改变烟曲....

图2.2部分形态改变突变体菌落形态

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图3.1快速质粒小提试剂盒法提取的pBHT1质粒Figure3.1RapidplasmidextractionkitextractedfrompBHT1plasmidM：Trans2KPlusIIDNAMarker；1：提取的pBHT1质粒；2、HindIII酶切后的

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本文编号：3946411