哈维氏弧菌YeaZ互作蛋白基因克隆表达及其性质研究

发布时间：2024-04-08 19:35

　　自然环境微生物资源丰富,但大部分处于不可培养或难培养状态,采用纯培养方法获得的微生物仅占环境中微生物总数的0.01%-10%。许多细菌在不良环境中进入休眠状态,即活的非可培养状态(Viable but nonculturable state,VBNC),在适宜条件下VBNC状态细菌能复苏为正常的可培养形式。弧菌是自然环境广泛存在的革兰氏阴性菌,其中哈维氏弧菌(Vibrio harveyi)是危害我国水产养殖动物重要病原菌之一,该菌在不良环境下可进入VBNC状态,细胞复苏后仍保持致病性。从VBNC状态恢复为可培养状态的作用机理尚未明确。本论文主要进行了哈维氏弧菌环境适应性相关蛋白YeaZ及主要互作蛋白YjeE、YgjD的研究,进行了yjeE、ygjD基因克隆、结构域特征、基因表达及酶活性分析,并研究了YeaZ活性位点不同突变体的酶活性和生物学作用,以探究哈维氏弧菌环境适应性及存活机制,主要研究内容如下:从哈维氏弧菌SF-1基因组扩增得到yjeE基因,大小为465bp,编码153个氨基酸的蛋白质。序列分析显示,yjeE基因序列与大肠杆菌(Escherichia coli)、副溶血弧菌(V....

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图2.1pUcm-T质粒图谱

图2.2pCzn1质粒图谱

8图2.2pCzn1质粒图谱Fig.2.2pCzn1vector主要设备和试剂

图2.3哈维氏弧菌yjeE基因的PCR扩增M.DL2000DNAMarker；1-2.PCR扩增产物Fig.2.3PCRproductofyjeEgeneobtainedbyamplificationfromVibrioharveyi1-2.PCRproductfromVibrio

上所述的缓冲液，酶促液待测酶液。生长作用菌生长促进作用，在5mL0.5mg/mL的YjeE蛋白促生长作用。以煮沸灭活于595nm波长下测定其检测胶电泳检测获得长度约为大小的yjeE基因全序列21M

图2.6哈维氏弧菌YjeE蛋白亲/疏水分析

脂肪系数（AI）为83.57，亲水性平均值（GRAVY）为-0.419。利用ProScaLe对哈维氏弧菌YjeE蛋白氨基酸序列的疏水性和亲水性进行预测（如图2.6），从图中可以知道，YjeE多肽链的Ile分值最高（4.500）具有最强的疏水性，Arg的分值最低（....

本文编号：3948704