维氏气单胞菌hfq基因的敲除及其对滞留形成的影响

发布时间：2024-04-23 22:28

　　Hfq(Host factor of the RNA bacteriophage Qβ,简称 Hfq)是细菌中普遍存在的全局调控因子,作为RNA分子伴侣,通过介导小RNA和信使RNA(sRNA-mRNA)的碱基配对影响其靶向转录物的翻译速率和寿命,涉及细菌的生长增殖、毒性和逆境耐受等多种生理生化过程。滞留菌指在遗传信息不发生改变的情况下逃避抗生素杀菌作用的细菌细胞。与耐药菌不同,滞留菌是一种处于休眠状态的表型变异细胞,几乎停止所有的生命活动,几乎对所有药物耐受。Hfq对细胞生长的重要性,推测其可能与滞留形成相关。Hfq相关的研究报道众多,但其在维氏气单胞菌(Aeromonas veronii)中的研究尚未发现,且Hfq关联滞留菌形成的实验只有大肠杆菌(Escherichia coli)背景下的少数案例报道。本论文基于维氏气单胞菌C4为背景,根据同源重组原理,构建维氏气单胞菌hfq突变株C4-Δhfq,并从转录水平证明敲除成功;接着检测C4-Δhfq的生长曲线及9种抗生素药物的最小抑菌浓度和最小杀菌浓度(MC/MBC)。实验表明,hfq基因敲除显著延缓维氏气单胞菌的生长速率,并且敲除菌表...

【文章页数】：59 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图１?Ｈｆｑ的结构及其与ＲＮＡ的作用??（Ｊｏｒｇ?Ｖｏｇｅｌ?ｅｔ?ａｌ．，?２０１５；?Ｔａｙｌｏｒ?Ｂ．?Ｕｐｄｅｇｒｏｖｅ?ｅｔ?ａｌ．，?２０１６）??：Ａ：?Ｈｆ二ＳｍｌＳｍ２Ｂ：?Ｈｆ

ｍａｒｋｅｄ?ｉｎ?ｇｒｅｅｎ；?Ｄ：?Ａ?ｓｉｍｕｌａｔｉｏｎ?ｏｆ?ｔｈｅ?ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ?ｂｅｔｗｅｅｎ?ＲＮＡ?（ｏｒａｎｇｅ）?ａｎｄ?ｔｈｅ?ｐｒｏｘｉｍａｌ?ｆａｃｅ??ｏｆ?Ｈｆｑ?ｌｏｏｐ；?Ｅ：?Ｓｉｍｕｌａｔｉｏｎ?ｏｆ?ｔｈｅ?ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏ....

图２维氏气单胞菌物基因同源敲除原理??Ｆｉｇ，?２?Ｔｈｅ?ｄｉａｇｒａｍ?ｓｈｏｗｉｎｇ?ｈｏｍｏｌｏｇｏｕｓ?ｋｎｏｃｋｏｕｔ?ｏｆ?ｈｆｑ?ｇｅｎｅ?ｉｎ?Ａ，?ｖｅｒｏｎｉｉ??

的序列设计同源片段，构建／？为基因敲除载体。当外源ＤＮＡ导入受体细胞后，??序列相似基因在受体细胞内发生同源重组，相似片段整合至受体细胞基因组中，??从而达到基因敲除的目的。如图２所示为按同源双交换敲除原理设计的实验策略??简图。??响辦贿?「……Ｖ?Ｋ?…Ｘ……一?：??５域交....

图４敲除质粒ＰＲＥ１１２－Ａ响的菌落ＰＣＲ鉴定??注：Ｍ：?ＤＬ５０００?ＤＮＡ?ｍａｒｋｅｒ；?１：敲除质粒ｐＲＥｌ?１２－Ａ／？＾的阳性转化子；２：维氏气单胞菌??

２０００ｂｐ??２５０ｂｐ??ｉｏ〇ｂｐ－＾＾Ｈ??■■■■■■■■■??３峋基因上，下游同源臂片段ＰＣＲ扩?ｍａｒｋｅｒ；?１：上游同源臂ＰＣＲ产物Ｕｐ－产物Ｄｏｗｎ??ｓ?ｏｆ?ｕｐｓｔｒｅａｍ?ａｎｄ?ｄｏｗｎｓｔｒｅａｍ?ｈｏｍｏｌｏｇｏＡ?ｍａｒｋｅｒ；?１：?ＰＣＲ?....

图３峋基因上，下游同源臂片段ＰＣＲ扩增产物??注：Ｍ：?ＤＬ５０００?ＤＮＡ?ｍａｒｋｅｒ；?１：上游同源臂ＰＣＲ产物Ｕｐ－物；２：物下游同源臂ＰＣＲ??

图３峋基因上，下游同源臂片段ＰＣＲ扩Ａ?ｍａｒｋｅｒ；?１：上游同源臂ＰＣＲ产物Ｕｐ－产物Ｄｏｗｎ??ｃｔｓ?ｏｆ?ｕｐｓｔｒｅａｍ?ａｎｄ?ｄｏｗｎｓｔｒｅａｍ?ｈｏｍｏｌｏｇｏｕＮＡ?ｍａｒｋｅｒ；?１：?ＰＣＲ?ｐｒｏｄｕｃｔｓ?ｏｆ?ｕｐｓｔｒｅａｍ?ｈｏｍｐｒｏｄｕｃｔ....

本文编号：3962841