抗虫彩叶基因聚合表达载体构建及在毛白杨中的转化研究

发布时间：2024-05-12 04:48

　　毛白杨生长迅速,树干通直挺拔,是我国重要的速生用材树种和园林绿化树种,在我国林业经济、生态建设和城乡绿化中发挥着重要的作用。但病虫危害严重影响毛白杨的正常生长,而叶色单一在一定程度上影响了毛白杨的观赏度。随着生物技术的发展,利用多基因聚合转化技术创制同时具有抗虫和彩叶特性的毛白杨新材料,对于毛白杨种质创新具有重要意义。Btcry Ⅱ基因编码的毒蛋白和丝氨酸蛋白酶抑制剂Bbi基因对鳞翅目害虫具有高毒力,CmOr基因可调控类胡萝卜素含量以改变叶色,本实验采用IRES元件构建了多基因聚合表达载体p CAMBIA1304-Btcry Ⅱ-IRES-CmOrIRES-Luc;利用农杆菌介导法将其和抗虫基因表达载体p CAMBIA1304-Bbi分别转入毛白杨TC1521无性系中,通过抗性筛选、PCR鉴定获得一批转基因阳性植株;进一步通过RT-PCR、qRT-PCR对外源基因的表达情况进行了分析,为后续进行抗虫试验、叶片色素测试等生理生化指标分析奠定了工作基础。本研究主要结果如下:1.以pCAMBIA1304质粒为骨架,构建了基于IRES元件的多基因聚合表达载体p CAMBIA1304-Btcry...

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【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图2.3质粒载体的PCR检测结果

多基因聚合表达载体设计与构建212.3.2载体的PCR鉴定用提取的质粒当做DNA模板，经PCR检测发现（图2.3），质粒载体中都可检测到BtcryII（773bp）和CmOr（440bp）的目的条带,证明BtcryII和CmOr基因都已经成功转入载体中，基于IRES元件的多基因聚....

图3.1多基因聚合表达载体转化后工程菌PCR验证

根癌农杆菌介导的植物表达载体在毛白杨中的遗传转化25图3.1多基因聚合表达载体转化后工程菌PCR验证Figure3.1PCRverificationofengineeredbacteriawithgenestackingstructureaftertransformationM：....

图3.2Bbi基因表达载体转化后工程菌PCR验证Figure3.2PCRverificationofengineeredbacteriawithBbigeneaftertransformation

根癌农杆菌介导的植物表达载体在毛白杨中的遗传转化25图3.1多基因聚合表达载体转化后工程菌PCR验证Figure3.1PCRverificationofengineeredbacteriawithgenestackingstructureaftertransformationM：....

图3.3毛白杨TC1521遗传转化过程

抗虫彩叶基因聚合表达载体构建及在毛白杨中的转化研究26图3.3毛白杨TC1521遗传转化过程Figure3.3GenetictransformationofP.tomentosaTC1521A:预培养；B~C：选择培养；D~F：生根培养图3.4获得的大量抗性苗Figure3.4A....

本文编号：3970887