大豆二酰甘油酰基转移酶基因GmDGAT1A启动子的克隆与功能分析

发布时间：2024-05-13 18:48

　　二酰甘油酰基转移酶(DGAT)是催化三酰甘油生物合成的关键酶,在三酰甘油的合成和积累过程中具有重要调控作用。为了研究大豆DGAT基因表达调控的分子机制,以大豆品种科丰1号为材料,通过PCR方法对GmDGAT1A的启动子(promoter-GmDGAT1A,pGmDGATIA)进行克隆,并通过转化拟南芥和GUS组织定位研究其功能。结果表明:以大豆叶片DNA为模板,成功克隆到GmDGAT1A基因ATG上游2 192 bp启动子序列。序列分析表明,pGmDGAT1A除具有启动子所必需的TATA-box和CAAT-box等基本顺式作用元件外,还含有多个响应于光、赤霉素和脱落酸等顺式作用元件。以GUS为报告基因,成功构建了植物表达载体pCAMBIA1381Z-pGmDGAT1A,并转化野生型拟南芥获得转基因植株。对转基因拟南芥植株进行PCR检测,能扩增到2 192 bp目标条带,表明已获得含有pGmDGAT1A的转基因拟南芥阳性植株。GUS组织化学染色结果显示,转基因拟南芥幼苗的叶脉和根染色较深,但是主根和侧根的根尖部分未染色;成熟期转基因拟南芥植株的根、叶脉以及角果内的隔膜和珠柄染色较深,茎和...

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【部分图文】：

图1大豆基因组DNA的提取(A)及GmDGAT1A启动子的扩增(B)

用已克隆的GmDGAT1A基因ID号(Glyma.13G106100/Glyma13g16560)检索大豆基因组数据库,得到其ATG上游约2000bp的启动子序列。然后,在该启动子序列上下游约500bp范围内设计1对特异性引物,并以大豆品种科丰1号DNA(图1-A)为模板,....

图2表达载体pCAMBIA1381Z-pGmDGAT1A的酶切鉴定

将pCAMBIA1381Z-pGmDGAT1A表达载体通过农杆菌介导法转化拟南芥,成熟后收获T0转基因种子。对T0转基因种子用含有潮霉素的MS培养基进行抗性筛选后,进一步对T1拟南芥幼苗进行基因组DNA提取和PCR检测。结果表明,T1转基因拟南芥幼苗和阳性对照(表达载体质粒)均能....

图3T1转基因拟南芥幼苗的PCR检测

对转pGmDGAT1A拟南芥植株各组织进行GUS组织化学染色,结果表明,pGmDGAT1A驱动的GUS主要在转基因拟南芥幼苗的叶脉(图4-A1-A2)和根(图4-A1、A3-A4)中表达,在主根和侧根的根尖部分(图4-A3-A4)不表达;在成熟期转基因拟南芥植株中,叶脉(图4-B....

图4转pGmDGAT1A拟南芥植株不同组织的GUS染色

图3T1转基因拟南芥幼苗的PCR检测3结论与讨论

本文编号：3972553