基于高通量测序技术检测地中海贫血突变型和缺失型的方法建立

发布时间：2024-05-15 18:30

　　地中海贫血(简称“地贫”)是由珠蛋白基因缺失或突变引起的遗传性溶血性贫血,是全球分布最广、累积人群最多的一种单基因遗传病。地贫目前尚无有效的治疗措施,并且治疗费用较高,因此,地贫人口的出生尤其是中间型和重型地贫患儿的出生给家庭和社会医疗卫生事业带来沉重的负担。地贫虽难治,但可防,做好婚前和孕前人群的地贫基因筛查,若夫妻双方筛查结果为地贫阳性者,再进行产前诊断,此措施可以有效的预防地贫患者的出生。随着PCR(聚合酶链反应)技术的不断完善,基因检测技术已成为地贫诊断的金标准,逐渐代替传统的血液常规检查和血红蛋白电泳技术,临床上常见的地贫基因检测技术包括Gap-PCR(跨越断裂点PCR)、PCR-RDB(反向点杂交)、PCR-流式荧光杂交法、基因芯片、MLPA(多重连接探针扩增技术)等,这些检测技术存在检测型别局限、成本高或无法同时检测缺失型和突变型的缺点。因此开发一种高通量、低成本并可同时检测缺失型和突变型的新技术迫在眉睫。本研究根据α-地贫和β-地贫相关的HBA1、HBA2和HBB三个基因的特点设计一系列引物,同时引入用于识别样本的标签序列。利用多重PCR技术将样本中的HBA1、HBA2...

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图2-1.primerindex和adaptorindex标记后的PCR产物示意图

华南理工大学硕士学位论文16PCR产物进行sanger测序，测序结果与参考基因序列做比对，序列一致并且测序峰图质量较好的引物作为最终确定的引物对。2.2.3.2缺失型引物设计基于跨越断裂点PCR（Gap-PCR）的原理，针对常见的α地贫缺失型–α3.7、–α4.2、--SEA、-....

图3-1DNA浓度分布情况

华南理工大学硕士学位论文32例已知地贫型别结果的样本进行验证实验，验证实验包括DNA提取和PCR扩增。（1）DNA提取结果本研究采用Magen的MagPureBlood&TissueDNAKFKit试剂盒对742份样本进行提取DNA，采用ND-8000分光光度计测定提取后DNA的....

本文编号：3974051