产富马酸及富马酸衍生物基因工程菌的构建

发布时间：2024-05-27 05:38

　　柠檬酸合成酶、顺乌头酸酶对柠檬酸循环强度影响较大,因此克隆两酶的基因,导入产富马酸菌StrainABCDIA,使富马酸产量在前人基础上进一步提高;然后,为了探究胞内NAD+/NADH 比值对富马酸积累的影响,在产富马酸菌StrainABCDIA内分别导入异源NADH氧化酶基因及自源转氢酶基因,富马酸单位质量产量为0.54 g/g菌体和0.67 g/g菌体,虽然生物量不及StrainABCDIA,但菌体自身的产酸能力得到增强,说明辅因子的调节有利于富马酸的积累。后对之前的研究进行整合优化,得到EcS、EcN、CgS、CgN四株菌。以改良的M9培养基进行重组菌的摇瓶发酵,在生物量和富马酸产量上,四株菌都比对照菌StrainABCDIA高,但是整体相差不大。其中CgS富马酸产量较高,达到0.511 g/L。但由于生长情况较差,这个产量没有达到预期。但对比菌体单位质量产量,CgS富马酸产量可以达到0.937 g/g菌体,与对照菌株StrainABCDIA单位产量相比提高20%,与其他菌株相比优势较为明显。从细胞内的辅因子NAD+/NADH来看,CgS比StrainABCDIA提高了40.24%...

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【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图１－１富马酸分子结构式??Ｆｉｇ．?１－１?Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ?ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ?ｏｆ?ｆｕｍａｒｉｃ?ａｃｉｄ??

?第一章绪论???第一章绪论??１．１富马酸概述??１．１．１富马酸的理化性质??富马酸，分子式为Ｃ４Ｈ４〇４，分子量为１１６．０７，结构式如图１－１所示。它是具有最??简单结构的不饱和二羧酸，包含有一个碳－碳双键和两个羧基。??ＨＯＯＣ?Ｈ??＼＝／??／?＼??Ｈ?ＣＯＯＨ?....

图１－２富马酸的应用??Ｆｉｇ．?１－２?Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ?ｏｆ?ｆｕｍａｒｉｃ?ａｃｉｄ??

费产品主要是柠檬酸，而富马酸也是一种??很好的食品酸味剂，而且具有显著的抗菌防腐作用。随着其发展和推广，富马酸在食??品中的份额将继续增加。此外，采用酶工程技术，以富马酸酶为催化剂，富马酸盐经??“晶体转化反应”转化为苹果酸，进一步加工的Ｌ－苹果酸可用于制酯及复合剂和调味??剂。....

图１－６尿素循环途径＿??Ｆｉｇ．?１－６?Ｔｈｅ?ｕｒｅａ?ｃｙｃｌｅ?ｐａｔｈｗａｙ??据文献报道，Ｙｕ等人［４６］的研宄中证明氨基酸和脂肪酸的代谢，对富马酸的积累??

ＴＰ??＾Ｃａｒｂａｍｏｙｌ－ｐｈｏｓｐｈａｔｅ??Ｙ?ｓｙｎｔｈａｓｅ?Ｉ??Ｃａｒｂａｍｏｙｌ－Ｐ????ｌ＾ｏｒｎｉｔｈｉｎｅ??ｏｒｎｉｔｈｉｎｅ?＾ｓｊｒａｎｓｃａｒｂａｎｏｙｌａｓｅ??／?Ｃｉｔｒｕｌｉｎｅ??Ｉ?ａｒｇｉｎｉｏｓｕｃｃｉｎａｔｅＸ??ｕｒｅａ?（?....

图１－８?ＮＡＤＰ＋与ＮＡＤＰＨ转化图??－＋

?北京化工大学硕士学位论文???Ｆｉｇ．１－７?Ｔｈｅ?ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎ?ｏｆ?ＮＡＤ＋ａｎｄ?ＮＡＤＨ??基因于大肠杆菌中属于自源表达，它更倾向于间接控制ＮＡＤ＋／ＮＡＤＨ比例。??对Ｍ编码可溶性吡啶核苷酸转氢酶，该酶具有ＮＡＤＰＨ、ＦＡＤ和二聚结合位点。由于??如....

本文编号：3982843