产柠檬酸黑曲霉中α-葡萄糖苷酶基因的敲除

发布时间：2024-05-31 23:41

　　柠檬酸是一种重要的多功能有机酸,广泛应用于食品、医药、化工等领域。我国是柠檬酸生产大国,柠檬酸产量占世界总产量的70%。但在柠檬酸发酵生产过程中,发酵液残糖含量2%左右,造成原料的极大浪费。分析发酵液残糖成分可知,其中约69%都是异麦芽糖,还有约23%为α-呋喃型葡萄糖苷,而这些非发酵性的糖主要是由α-葡萄糖苷酶的催化形成的。因此,柠檬酸发酵过程中决定残糖形成的关键酶之一是α-葡萄糖苷酶。本研究通过分析产柠檬酸黑曲霉基因组序列,分析其中可能的α-葡萄糖苷酶基因并进行基因敲除,降低残糖含量,提高糖类的利用率和柠檬酸的产量。具体展开以下研究工作:1.运用农杆菌介导的方法转化产柠檬酸黑曲霉,分别敲除了α-葡萄糖苷酶A基因及假定-α-葡萄糖苷酶基因-40261,得到敲除突变株KO-214233及KO-40261。2.研究两个基因敲除菌株的生长状态发现,两株敲除菌株与野生型菌株相比菌落形态、孢子形态和菌体生长速度无明显变化,但菌丝球形态与大小发生改变。敲除突变株KO-214233相比敲除突变株KO-40261及野生型菌株的菌丝球边缘更为光滑;敲除突变株KO-214233菌丝球周长最小,敲除突变株...

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【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图３－２?ｐＰＺＰ骨架和ＨＹＧ片段回收的掠脂糖电泳阳??

因左、右同源臂并连接至Ｔ载体，得到重组质粒２１４２３３Ｌ－Ｔ和２１４２３３Ｒ－Ｔ。然??后用／／ｈｄｌＩＩ和兮ｅｌ酶ｔ刀重组质粒２１４２３３Ｌ－Ｔ，用和印《丨酶切重组质粒??２１４２３３Ｒ－Ｔ，胶回收目的基因。结果如图３－１所示。??Ｍ?１?２??ｂｐ＿：＿；??腦??３０００?....

图３－丨２１４２３３Ｌ－Ｔ、２１４２３３Ｒ－Ｔ胶回收琼脂糖电泳图??

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图3-3敲除载体pPZP-214233的构建

?３结果与讨论???如上图所示，胶回收片段与理论值大小一致，且回收亮度较好。??３．１．３敲除载体ｐＰＺＰ－２１４２３３的构建??将上述切胶回收得到的四个片段按２．２．３．６?（２）方法进行１６°Ｃ过夜连接，然??后转化大肠杆菌ＪＭ１０９感受态，经Ｋａｎａ抗性平板筛选，挑取单克隆....

图３－４重组质粒ｐＰＺＰ－２１４２３３酶切验证??

将上述切胶回收得到的四个片段按２．２．３．６?（２）方法进行１６°Ｃ过夜连接，然??后转化大肠杆菌ＪＭ１０９感受态，经Ｋａｎａ抗性平板筛选，挑取单克隆抗体进行??提质粒。敲除载体ｐＰＺＰ－２１４２３３构建如图３－３所示。??Ｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅ?ＤＮＡ?ｏｆ?Ａ．ｎｉｇｅｒ??＼....

本文编号：3985248