CHO细胞中DNMT3A对ATF3基因甲基化的影响

发布时间：2024-06-08 07:12

　　转录激活因子3(ATF3)是一种早期应激反应基因,能够影响细胞增殖、分化、转化和凋亡。中国仓鼠卵巢细胞(CHO)是重组蛋白、单克隆抗体等生物大分子药物生产的主要宿主细胞之一。ATF3能够促进肿瘤细胞的增殖及抗凋亡等作用,理论上可对CHO细胞发挥调节作用。因此本试验对CHO细胞中ATF3的甲基化水平进行深入研究,通过重亚硫酸盐测序法检测CHO-K1细胞中ATF3的甲基化水平,发现ATF3启动子区域的胞嘧啶-磷酸-鸟嘌呤(CpG)甲基化高达90%。为了进一步研究ATF3甲基化的上游调控机制,构建了敲除DNA甲基转移酶3A(DNMT3A)的CHO-K1来研究DNMT3A对ATF3甲基化水平的影响。结果表明,敲除DNMT3A后,CHO-K1细胞中的ATF3甲基化水平降低至0,这充分证明了DNMT3A对ATF3的甲基化的调控作用,为CHO细胞的ATF3基因调控研究以及后续CHO细胞株改造提供了理论依据。

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【文章目录】：
1材料与试剂
    1.1细胞及质粒
    1.2 酶及抗体
    1.3 试剂盒
    1.3 试剂
    1.4 培养基
    1.5 引物合成及检测分析
2 方法与结果
    2.1 培养基的配制
    2.2 构建DNMT3A敲除细胞株
        2.2.1 小向导RNA的设计以及Crispr/Cas9系统敲除载体的构建
        2.2.2 细胞培养和转染
        2.2.3 单克隆细胞株的筛选和检测鉴定
    2.3 ATF3基因启动子区域甲基化检测
3 讨论



本文编号：3991645