大豆GmPHD3基因的克隆及逆境表达分析

发布时间：2024-09-23 20:53

　　 为探讨大豆PHD-finger转录因子家族编码基因GmPHD3在抵抗中国南方高温高湿非生物胁迫造成种子劣变过程中的调控作用,分离全长GmPHD3基因并进行生物信息学分析、亚细胞定位和转录激活活性分析,以种子劣变抗性品种湘豆3号和不抗品种宁镇1号叶片及不同组织cDNA为材料,通过RT-PCR,进行组织表达模式分析和高温高湿胁迫下的表达模式分析。生物信息学分析结果表明基因CDS序列长度为738 bp,编码246个氨基酸,包含Alfin和PHD-finger 2个结构域。进化树结果表明该基因与木豆ALFIN-Like 3-like（XM₀20363358.1）的遗传距离较近。亚细胞定位结果显示该蛋白在细胞核内表达。转录激活试验结果表明基因全长有转录激活活性,激活域为N端Alfin结构域,C端PHD-finger结构域无转录激活活性。组织表达模式分析发现该基因主要在成熟期高表达,且2个品种间存在差异。胁迫下的表达模式分析发现随着胁迫时间的延长,基因的表达量逐渐升高。研究结果为进一步阐明高温高湿胁迫下的调控机制研究奠定一定理论基础。

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【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 材料
    1.2 试验设计
    1.3 方法
        1.3.1 RNA提取与cDNA第一链合成
        1.3.2 基因的分离与生物信息学分析
        1.3.3 亚细胞定位载体构建及蛋白定位观察
        1.3.4 酵母表达载体构建及转录激活活性分析
        1.3.5 qRT-PCR分析
    1.4 数据分析
2 结果与分析
    2.1 基因的分离与生物信息学分析
    2.2 GmPHD3蛋白的亚细胞定位
    2.3 转录激活活性分析
    2.4 组织表达模式分析
    2.5 高温高湿胁迫下的基因表达模式分析
3 讨 论
4 结 论



本文编号：4006154