基于等位基因引物和Taqman探针的结直肠癌KRAS基因检测qPCR的研究

发布时间：2024-11-20 21:53

　　结直肠癌KRAS基因位于人体12号染色体的2号外显子(Exon)上,在膜受体到腺苷酸环化酶的信号转导中起着重要的作用。近年来,KRAS基因与抗EGFR抗体疗效具有相关性是结直肠癌的研究领域中最突出的成果。研究结果显示,只有KRAS未突变的患者,才推荐使用抗表皮生长因子受体(EGFR)单克隆抗体进行治疗。因此,靶向用药前的基因突变检测显得尤为重要。本研究拟建立一种经济、简便且灵敏度高的结直肠癌KRAS基因检测技术。通过基因克隆成功构建出7种常见的KRAS基因突变序列,并设计7种等位基因引物和共用Taqman探针。单对引物检测构建成功的突变模板及等位基因引物和Taqman探针的特异性。7对引物混合后加入Taqman探针,利用qPCR分别检测构建成功的7种常见KRAS基因突变序列,搭建稳定的检测体系。对构建的混合等位基因引物和Taqman探针qPCR检测体系进行分析性能测试:(1)结直肠癌KRAS野生型组织DNA为背景,将7种KRAS突变序列制备成相当于10%、1%、0.1%和0.01%突变浓度的样品。结果显示,最低检测限为0.1%。(2)结直肠癌KRAS野生型组织DNA为背景,分别检测含有5...

【文章页数】：95 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图1.1KRAS基因编码蛋白结构

已知有三种类型的RAS基因(HRAS、KRAS和NRAS)与人类肿瘤相关。位于12号染色体上的KRAS基因，其所编码的RAS蛋白，作为表皮生长因子受体(epidermalgrowthfactorreceptor,EGFR)发挥信号传递功能的组成部分，在....

图1.2KRAS基因突变状态调控机制

图1.2KRAS基因突变状态调控机制近些年来，KRAS基因状态与抗EGFR抗体药物治疗之间具有显著的相关性的研究结果是结直肠癌治疗领域中的一项重大的发现。对于研究KRAS的基因状态与抗EGFR药物两者之间关系的过程中，早在十年前的美国临床肿瘤学会(Americ....

图2.1构建KRAS基因突变序列示意图

16图2.1构建KRAS基因突变序列示意图2.1实验材料2.1.1实验菌株与培养基感受态Top10细胞及pUC57载体购于赛默飞世尔(中国)有限公司LB液体培养基(1L)：蛋白胨10g、酵母浸粉5g、NaCl10g。LB固体培养基(1L)：蛋....

图2.2KRAS基因突变序列1%琼脂糖凝胶电泳验证结果

菌的ddH2O于吸附柱的膜中间部位，为了使吸附柱中的核酸被完全洗脱下来需试验台内静止5min，1.2×104rpm离心2min收集含有构建好的KRAS突变序列的质粒溶液。(11)吸附柱中可能会残留质粒，通过将步骤(10)中收集的质粒溶液重新加入吸附柱中，1.....

本文编号：4012413