短发夹RNA沉默TRPV2基因抑制大鼠脊柱侧凸模型椎间盘退变的实验研究

发布时间：2024-11-26 22:24

　　 目的利用短发夹 RNA (shRNA) 技术构建 TRPV2 基因的沉默表达慢病毒载体,探究其在大鼠脊柱侧凸模型椎间盘退变中的作用。方法本研究采用经典的双足大鼠脊柱侧凸模型构建的方法。根据基因沉默干扰原理,构建 shRNA TRPV2 干扰载体,根据实验目的,将 SD 大鼠分成对照组、模型组和 shRNA 组。对上述动物模型摄 X 线片,对椎间盘髓核组织进行 HE 染色,对椎间盘髓核组织进行 II 型胶原蛋白和 Aggrecan 蛋白的免疫组织化学染色,利用 RT-PCR 和 Western blot 检测髓核组织中炎性因子 iNOS、COX-2、MMP-9 和凋亡因子 Caspase-6、Caspase-3 和 Caspase-9 的 mRNA 和蛋白表达水平。结果慢病毒量转染效率较高,为 (92.3±2.7) %。对照组 SD 大鼠无明显侧凸,模型组 SD 大鼠脊柱向左侧凸,Cobb’s角为(31.22±2.18) °;shRNA 组 SD 大鼠脊柱向左侧凸,Cobb’s角为 (18.07±3.09) °。RT-PCR 结果显示,模型组髓核组织中炎性因子 iNOS、COX-2、MM...

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图4 Western blot表达结果

图3髓核组织中mRNA的相对表达水平图5髓核组织HE染色结果(×200)

图 1 慢病毒转染效率检测。shRNA-TRPV2 的载体可以通过慢病毒转入细胞内,可被激发出绿色荧光。慢病毒转染效率=荧光下视野细胞数 / 白光下视野细胞数 × 100%

表1目的基因的引物序列Tab.1Primersequenceoftargetgenes引物名称引物序列iNOS正义链5’-CATGGCTTTGGATGGAGAGT-3’反义链5’-TGGGAGTTTGCTCTTCAAGG-3’COX-2正义链5’....

图2 影像学资料

图1慢病毒转染效率检测。shRNA-TRPV2的载体可以通过慢病毒转入细胞内,可被激发出绿色荧光。慢病毒转染效率=荧光下视野细胞数/白光下视野细胞数×100%结果显示,模型组髓核组织中炎性因子iNOS、COX-2、MMP-9和凋亡相关因子Caspase-3,6....

图3 髓核组织中mRNA的相对表达水平

既往研究主要针对AIS病因学,而病因学研究的重点在于动物模型的构建[9-10]。有学者对4足哺乳动物SD大鼠采用切除大脑松果体和4足哺乳动物腹腔注射褪黑素抑制剂的方法构建SD大鼠的脊柱侧凸模型,结果两组4足SD大鼠均未发生脊柱侧凸。而采用切除前足的方法....

本文编号：4012681