鱼腥藻PCC7120基因alr0267敲除及其功能的初步研究

发布时间：2017-06-25 01:15

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【摘要】：【目的】敲除鱼腥藻PCC 7120的alr0267基因,并对其功能进行初步研究。【方法】克隆获得鱼腥藻PCC 7120 alr0267基因部分片段,通过构建敲除载体,使其与目的基因发生单交换同源重组,从而将鱼腥藻PCC 7120中的alr0267基因敲除,并对敲除体进行纯化和PCR鉴定,然后对alr0267敲除体和野生型固氮异形胞进行形态观察和统计,同时采用实时荧光定量PCR,在培养不同时间(0,3,8,24h和10d)检测野生型和alr0267基因敲除体中与异形胞功能相关基因all0813、all2736、alr2887的相对表达量。【结果】鱼腥藻PCC 7120 alr0267基因被成功敲除;在缺氮条件下培养6~12d,敲除体异形胞营养细胞数的均值明显少于野生型;实时定量PCR分析表明,野生型中all0813、all2736、alr2887基因表达量均在培养24h达到最大,敲除体中这3个基因最大相对表达量的出现时间均有所延迟。【结论】alr0267基因敲除导致异形胞分化频率增加,同时影响异形胞的正常发育。
【作者单位】： 华南农业大学生命科学学院广东省农业生物蛋白质功能与调控重点实验室;华南农业大学农学院;
【关键词】： 鱼腥藻PCC alr基因 异形胞 单交换同源重组 实时荧光定量PCR
【基金】：广东省自然科学基金项目(S2013010013184) 公益性行业(农业)科研专项(201003021) 国家自然科学基金项目(50977041)
【分类号】：Q943.2
【正文快照】： 鱼腥藻PCC 7120(Anabaenasp.PCC 7120)是一种能固氮的丝状蓝藻,其在缺氮环境下,沿着丝体每隔一定数量的营养细胞即可分化出一个固氮细胞,此固氮细胞被称作异形胞。当鱼腥藻PCC 7120被置于缺氮环境中时,细胞内的α-酮戊二酸开始积累[1-2],即使在加氮环境下,人为地增加蓝藻细胞

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