高通量检测花生油酸含量相关基因AhFAD2等位变异的方法

发布时间：2017-06-26 02:20

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【摘要】：花生(Arachis hypogaea)Δ12脂肪酸去饱和酶基因(Δ12fatty acid desaturase,Ah FAD2A和Ah FAD2B)是决定花生籽粒油酸含量和高油酸亚油酸比值(oleic acid/linoleic acid,O/L)的关键基因,高油酸花生品种中这2个基因均发生突变。针对普通油酸花生和高油酸花生Ah FAD2A 448位G/A差异和Ah FAD2B 442位A碱基的插入/缺失(insertion-deletion,In Dels)等位差异,已开发了包括酶切扩增多态性序列法(cleaved amplified polymorphic sequence,CAPS)和等位基因特异PCR(allele-specific PCR,AS-PCR)等多种检测的标记和检测方法。本研究针对上述2个SNP位点,开发了可进行高通量检测的实时定量PCR引物、Taq Man探针和检测技术,该方法检测效率和准确率均很高。本研究还开发了更为经济和高效的竞争性等位基因特异性PCR(kompetitive allele specific PCR,KASP)引物和检测方法。利用开发的Taq Man探针检测方法和KASP方法检测了14个花生品种和高油酸选育回交组合BC2F1和BC1F2群体部分种子的基因型,并比较了两种方法检测结果的一致率,发现这两种方法检测Ah FAD2B 442 nt A/-In Del差异结果的一致率高达96.7%;而针对Ah FAD2A 448位G/A差异位点检测一致率仅为71.7%。本研究还比较了目前常用的CAPS、AS-PCR、测序法、Taq Man探针法及KASP方法的优缺点,对相关方法的应用前景进行了讨论。本研究涉及的高通量检测方法可有效地辅助高油酸品种的选育,极大地提高了目标性状选择的准确性和效率。
【作者单位】： 山东省农业科学院生物技术研究中心/山东省作物遗传改良与生理生态重点实验室;山东省潍坊市农业科学院;山东大学农学院;
【关键词】： 花生脂肪酸去饱和酶基因(AhFAD) 等位变异 油酸 检测方法 花生
【基金】：国家自然科学基金(No.31201272) 山东省农业良种工程(No.2014-2016) 玛氏集团巧克力事业部全球花生可持续发展计划
【分类号】：S565.2
【正文快照】： 花生(Arachis hypogaea)籽粒脂肪酸的组成是衡量花生品质的重要指标。高油酸亚油酸比值(oleicacid/linoleic acid,O/L)的花生及其制品不易氧化和腐败,货架期较长。有研究表明,烘焙后的高油酸花生较普通油酸含量花生贮存期延长8倍(Mozin-go et al.,2004);而高油酸花生压榨的花

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