灰葡萄孢菌核形成相关基因功能的初步研究

发布时间：2017-06-26 17:19

  本文关键词：灰葡萄孢菌核形成相关基因功能的初步研究，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：灰霉病在果蔬生产和储运过程中危害严重。灰葡萄孢(Botrytis cinerea)是引起植物灰霉病的主要病原菌,其寄主范围十分广泛,可侵染200多种植物(如葡萄,番茄,草莓和黄瓜等)。灰葡萄孢的菌核可抵御不利的生存环境,在灰霉病的病害循环中起重要作用。筛选灰葡萄孢菌核形成过程中的差异表达基因,并研究其在菌核形成过程中的功能,有助于探索控制灰葡萄孢菌核形成的防治措施,对生产实践中防治灰霉病具有重要意义。本研究从以下几个方面对灰葡萄孢菌核形成相关基因进行了初步研究。1.从灰葡萄孢菌丝生长及菌核形成阶段的RNA-Seq测序数据中,筛选出在菌核形成过程中表达量显著上调的基因BC1G_10330、BC1G_02018和BC1G_06890,并通过荧光定量PCR证实了这3个基因的表达量在菌核形成过程中显著上调。2.利用分割标记法和同源重组原理,采用PEG介导的原生质体转化方法,对灰葡萄孢菌株B05.10的BC1G_10330、BC1G_02018和BC1G_06890基因进行了敲除,并对得到的敲除转化子进行单孢分离纯化,获得了纯合的目标基因敲除转化子。3.比较了各个基因的敲除转化子与原始菌株B05.10在菌核形成、生长速度、菌落形态、产孢量和致病力等方面的差异,为进一步明确这些基因在灰葡萄孢中的功能奠定了基础。
【关键词】：灰葡萄孢 菌核形成 致病 醛酮还原酶
【学位授予单位】：华中农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：S432.4
【目录】：

• 摘要7-8
• ABSTRACT8-9
• 缩略词表9-10
• 第一章 前言10-16
• 1. 灰葡萄孢研究进展10-15
• 1.1 灰葡萄孢的分布和危害10
• 1.2 灰葡萄孢的分类地位及生物学特性10-11
• 1.3 灰霉病的病害循环11
• 1.4 灰葡萄孢的致病因子11-12
• 1.5 灰葡萄孢菌核形成相关因素12-13
• 1.6 灰霉病的防治13-14
• 1.7 灰葡萄孢遗传转化研究进展14-15
• 2. 研究目的与意义15-16
• 第二章 灰葡萄孢中基因敲除转化子的获得与验证16-33
• 1. 试验材料16-18
• 1.1 菌株16
• 1.2 培养基16-17
• 1.3 载体17
• 1.4 实验试剂17-18
• 1.5 试验仪器18
• 2. 实验方法18-26
• 2.1 基因的获得18
• 2.2 基因相对表达量测定18-21
• 2.2.1 总RNA提取18-19
• 2.2.2 cDNA合成19-20
• 2.2.3 qRT-PCR检测基因的相对表达量表达20-21
• 2.3 基因敲除21-26
• 2.3.1 同源重组原理21
• 2.3.2 基因组DNA的提取21-22
• 2.3.3 转化用片段的扩增22-24
• 2.3.4 PEG介导的原生质体转化24-26
• 2.4 灰葡萄孢基因敲除转化子的验证26
• 2.4.1 基因敲除转化子的PCR验证26
• 3. 试验结果与分析26-33
• 3.1 灰葡萄孢中BC1G_10330、BC1G_02018和BC1G_06890基因的序列分析26-27
• 3.2 基因表达差异验证27-28
• 3.3 基因敲除转化子的获得与验证28-31
• 3.3.1 灰葡萄孢基因BC1G_10330的敲除与验证28-29
• 3.3.2 灰葡萄孢基因BC1G_02018的敲除与验证29-30
• 3.3.3 灰葡萄孢基因BC1G_06890的敲除与验证30-31
• 3.4 小结与讨论31-33
• 第三章 灰葡萄孢基因BC1G_10330、BC1G_02018和BC1G_06890的基因功能初步研究33-44
• 1. 实验材料33
• 1.1 试验菌株33
• 1.2 培养基33
• 2. 试验方法33-35
• 2.1 菌丝生长速度测定33
• 2.2 转化子菌丝尖端形态33-34
• 2.3 转化子产孢量测定34
• 2.4 转化子菌落形态观察34
• 2.5 转化子产酸能力测定34
• 2.6 转化子致病力测定34-35
• 2.7 转化子菌核形成过程及菌核分布形态情况35
• 2.8 转化子菌核生物学性状研究35
• 3. 试验结果35-42
• 3.1 转化子的菌丝生长速度35-36
• 3.2 转化子菌丝尖端形态36
• 3.3 转化子产孢量测定36-37
• 3.4 转化子菌落形态观察37-38
• 3.5 转化子产酸能力测定38
• 3.6 转化子的致病力测定38-40
• 3.7 转化子菌核形成过程及菌核产生情况40-42
• 4. 小结与讨论42-44
• 第四章 总结与展望44-46
• 参考文献46-51
• 致谢51

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前5条

1 高智谋;李艳梅;李喜玲;章战华;营金凤;;源自不同寄主的灰葡萄孢生物学特性的比较研究[J];菌物学报;2009年03期

2 郑超;刘学敏;张箭;;温室番茄灰霉病流行动态预测[J];东北农业大学学报;2007年02期

3 王惠,董金皋,商鸿生;灰葡萄孢毒素的生物活性测定和除草活性成分分离研究[J];中国农业科学;2004年02期

4 李保聚,朱国仁,赵奎华,乔勇;番茄灰霉病在果实上的侵染部位及防治新技术[J];植物病理学报;1999年01期

5 朱建兰;番茄灰霉病菌的生物学特性研究[J];甘肃农业大学学报;1995年01期

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本文编号：486976