食管癌Eca109细胞的HPV16-E6基因转染条件优化

发布时间：2017-06-29 07:04

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【摘要】：目的确定HPV16-E6基因转染食管癌Eca109细胞的最佳转染条件。方法取体外培养的食管癌Eca109细胞,用中心复合试验设计分组,转染条件控制因素包括DNA用量、Lip2000/DNA和饥饿时间,DNA用量分0.65、1.00、1.50、2.00、2.35μg共5档,Lip2000/DNA分0.65、1.00、1.50、2.00、2.35μL/μg共5档,饥饿时间分0、3、7.5、12、15 h共5档,共设20个组。转染24 h后,倒置显微镜下观察各组荧光情况并拍照,用图像处理软件计算细胞转染效率;用CCK-8法测算各组细胞相对存活率。用响应曲面法绘制有交互影响的因素对细胞转染效率和相对存活率影响的响应曲面,以目的基因细胞数(转染效率×细胞存活率)最大化为原则,确定最佳转染条件。在最佳转染条件下用HPV16-E6基因转染食管癌Eca109细胞,检测细胞转染效率和相对存活率。结果随着饥饿时间延长,细胞转染效率和细胞相对存活率呈下降趋势。依据饥饿0 h的转染效率、细胞存活率响应曲面图,得出最佳转染条件为(24孔培养板):DNA用量1.35μg、Lip2000/DNA1.12μL/μg(换算成Lip2000用量为1.51μL)、细胞饥饿时间0 h;转染效率预测值可达38.68%,细胞相对存活率预测值为85.09%。在最佳转染条件下用相同方法转染,实际转染效率为39.79%,与预测值的相对误差为2.87%。结论 HPV16-E6基因转染Eca109细胞的最佳转染条件(24孔板)为:每孔DNA用量1.35μg,脂质体Lip2000用量1.51μL,不对细胞进行饥饿处理。
【作者单位】： 石河子大学医学院第一附属医院;
【关键词】： 食管癌 人乳头瘤病毒 基因转染效率 细胞相对存活率 实验设计
【基金】：国家自然科学基金资助项目(81260362)
【分类号】：R735.1
【正文快照】： 人乳头状瘤病毒(HPV)是一种具有高度特异性的嗜上皮性病毒,与宫颈癌的发病密切相关,HPV16黏膜高危亚型与食管癌发病的关系尤其密切[1,2],但其相关程度以及HPV对食管癌细胞的作用机制并没有明确的定论[3,4]。研究HPV16对食管癌细胞的影响首先要通过基因转染技术将HPV16核酸片段

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