绿色荧光蛋白转基因大鼠骨髓间充质干细胞培养及鉴定

发布时间：2017-06-29 19:12

  本文关键词：绿色荧光蛋白转基因大鼠骨髓间充质干细胞培养及鉴定，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的体外分离、培养和鉴定增强型绿色荧光蛋白(EGFP)转基因大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)。方法取EGFP转基因大鼠胫、股骨骨髓,全骨髓贴壁法分离培养、纯化BMSCs;荧光显微镜观察细胞形态;流式细胞仪分析细胞表型;CCK-8法绘制细胞生长曲线并与野生型BMSCs增殖情况相比较;分别向成脂、成骨、成软骨诱导分化鉴定;将细胞经鼠尾静脉移植入大鼠体内,观察其在体内定植情况。结果获得稳定表达EGFP的BMSCs,以长梭形为主,融合后呈漩涡状排列;生长曲线示EGFP-BMSCs增殖能力旺盛,与野生型BMSCs相比差异无统计学意义(t=-0.023,P=0.982);细胞CD29、CD90、CD34、CD49d、CD45表达率分别为99.4%、96.4%、0.171%、0.049%、0.038%;成脂、成骨、成软骨诱导后,分别给予油红O、茜素红、甲苯胺蓝染色,结果均呈阳性;在肺组织内可检测到稳定的绿色荧光。结论成功获得高纯度、稳定表达EGFP的BMSCs,干细胞特性不受EGFP影响。细胞定植后,示踪效果良好,可用于后续实验研究。
【作者单位】： 东南大学附属中大医院儿科;东南大学附属中大医院心胸外科;
【关键词】： 骨髓间充质干细胞 绿色荧光蛋白 诱导分化
【基金】：国家自然科学基金(81370739) 江苏省自然科学基金(BK20131303)~~
【分类号】：R329
【正文快照】： Acta Acad Med Sin,2016,38(1):9-15间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)是来源于中胚层的一类多能干细胞,主要存在于结缔组织和器官间质中[1-3]。MSCs有维持组织和器官动态平衡、修复再生等重要作用[3-9],而来源于骨髓的MSCs(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSC

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