响应葡萄根瘤蚜侵染的扩展蛋白基因筛选及其多克隆抗体的制备

发布时间：2017-07-01 05:12

  本文关键词：响应葡萄根瘤蚜侵染的扩展蛋白基因筛选及其多克隆抗体的制备，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：以对葡萄根瘤蚜敏感的‘克瑞森无核’葡萄(Vitis vinifera ‘Crimson Seedless’)组培苗和抗性砧木‘1103P’组培苗为试材,通过荧光定量PCR技术从扩展蛋白基因家族中筛选到经根瘤蚜侵染后表达上调的扩展蛋白基因家族成员VvEXPA1。采用RT-PCR方法克隆到VvEXPA1基因片段,连接至原核表达载体pET-32a中,转化大肠杆菌DE3菌株,测序确定构建的重组载体pET32a-VvEXPA1开放阅读框正确,并经IPTG诱导表达了融合蛋白。该蛋白以包涵体的形式存在,纯化后免疫新西兰兔,制备扩展蛋白多克隆抗体,通过Western-blot和ELISA检测抗体的特异性及效价。结果显示制备的抗体具有较高的特异性,ELISA显示效价为1:51 200。
【作者单位】： 山东农业大学园艺科学与工程学院 作物生物学国家重点实验室;齐鲁工业大学生物工程学院;
【关键词】： 葡萄 根瘤蚜 扩展蛋白 VvEXPA 多克隆抗体制备
【基金】：国家自然科学基金项目(31201609) 山东省中青年科学家基金项目(BS2012NY007) 山东省自然科学基金项目(ZR2013CQ022) 高等学校博士学科点专项科研基金项目(20113702120007)
【分类号】：S436.631.21
【正文快照】： 葡萄根瘤蚜(Daktulosphaira vitifoliae Fitch)是葡萄专性寄生害虫,侵染敏感葡萄品种后,侵染位点周围细胞开始加速生长(Kellow et al.,2004;Du et al.,2011),细胞体积加速膨大(杜远鹏,2010),外观上表现为产生膨大的瘤状组织(Forneck et al.,2001),根瘤蚜在瘤状组织上取食并完

  本文关键词：响应葡萄根瘤蚜侵染的扩展蛋白基因筛选及其多克隆抗体的制备，，由笔耕文化传播整理发布。

本文编号：504680