FSHβ基因启动子多态性与多囊卵巢综合征的相关性研究

发布时间：2017-07-01 19:28

  本文关键词：FSHβ基因启动子多态性与多囊卵巢综合征的相关性研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：背景多囊卵巢综合症(PCOS),是女性患者中常见的内分泌疾病,其常伴有持续不排卵、胰岛素抵抗以及高雄激素血症。表现为与遗传因素、易感因素、环境因素等多个因素相关的复杂的发病机制。目前FSHβ亚基的启动子区域-211G-T突变的研究表明可能与体内FSH水平存在相关。由于FSH在卵巢功能紊乱的发病中的重要性,且目前没有进一步的实验研究证明FSHB-211G-T突变与PCOS相关。因此可以通过获取启动子序列并构建重组质粒通过荧光素酶表达效率变化,从FSH的转录调节等因素来进一步研究证实证实FSHB基因多态性与PCOS的相关性。目的克隆人卵泡刺激素β亚基(Follicle Stimulating Hormone β-subunit, FSHB)的启动子；构建FSHB启动子的报告基因载体并进行活性分析。方法设计合成FSHβ启动子引物,采用PCR技术从人基因组DNA中扩增FSHβ启动子；将扩增片段插入载体并利用酶切与测序进行鉴定；亚克隆该基因至pGL6-TA荧光报告基因载体；瞬时转染进Hela细胞,收集细胞液后,用荧光素酶报告基因系统检测报告基因载体的活性。结果PCR扩增得到人FSHβ基因启动子；成功构建pGL6-TA-FSHB-promoter报告基因载体,测序结果表明启动子序列正确；报告基因载体通过荧光素酶报告基因检测系统证实具有活性。通过荧光素酶相对表达效率比较,在Hela细胞的体外实验中发现,FSHB-211G→T突变后荧光素酶表达具有更高的效率并具有统计学差异,P0.05。结论成功地克隆了人FSHB基因启动子基因序列,报告基因载体的构建,继续研究FSHB转录调节等有了理论和技术的基础。FSHβ启动子的-211G-T可能与PCOS发病有关。
【关键词】：多囊卵巢综合征 卵泡刺激素 单核苷酸多态性 荧光素酶表达效率
【学位授予单位】：安徽医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R711.75
【目录】：

• 英文缩略语表5-6
• 中文摘要6-8
• 英文摘要8-10
• 1. 引言10-12
• 2. 实验材料与方法12-32
• 2.1 实验试剂12-14
• 2.2 实验仪器14-15
• 2.3 分析软件及电子数据库查询信息15
• 2.4 实验方法与步骤15-32
• 2.5 统计分析32
• 3. 实验结果32-35
• 4. 讨论35-39
• 5. 优势及不足39
• 6. 结论39-40
• 7. 参考文献40-44
• 附录44-45
• 个人简历44
• 在读期间发表论文44-45
• 致谢45-46
• 课题综述 多囊卵巢综合症相关基因多态性研究进展46-53
• 参考文献50-53

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本文编号：507209