水牛ghrelin基因原核表达载体构建与蛋白表达
本文关键词：水牛ghrelin基因原核表达载体构建与蛋白表达
【摘要】：为了研究水牛ghrelin基因的结构与功能,本试验对水牛ghrelin基因进行原核表达载体构建与融合蛋白表达条件的优化。采用RT-PCR方法从水牛胃组织的总RNA中扩增出ghrelin编码区,连接到pRSET-a载体中,转化大肠杆菌BL21(DE3),挑取阳性克隆子,用IPTG进行诱导表达条件的优化。结果表明,成功构建原核表达载体pRSET-a-ghrelin,在2 mmol/L IPTG,37℃的条件下诱导表达4 h,水牛ghrelin重组蛋白可成功获得表达,经SDS-PAGE鉴定发现,ghrelin融合蛋白主要以包涵体形式存在,分子量约为20 ku,其表达量占总菌体蛋白量的35%。本试验结果为进一步研究水牛ghrelin基因的结构和功能提供有价值的生物学信息。
【作者单位】： 广西中医药大学;广西大学动物科学技术学院;
【关键词】： Ghrelin 水牛 基因克隆 原核表达
【基金】：广西自然科学基金资助项目(2014GXNSFBA118140) 广西大学科研基金资助项目(XBZ130294)
【分类号】：S823.83
【正文快照】： ghrelin是一个由28个氨基酸残基组成的内源性肽类激素,主要由胃组织分泌,与生长激素促分泌素受体(growth hormone secretagogue receptor,GHS-R)结合发挥促进生长激素(growth hormone,GH)分泌的作用[1]。人、啮齿类动物和猪ghrelin结构高度保守[2-3],ghrelin的第三位丝氨酸N-
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