TNNI3K基因过表达诱导小鼠胚胎干细胞向心肌细胞分化

发布时间：2017-07-04 13:04

  本文关键词：TNNI3K基因过表达诱导小鼠胚胎干细胞向心肌细胞分化

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【摘要】：目的研究肌钙蛋白Ⅰ相关激酶(TNNI3K)对小鼠胚胎干细胞(m ESC)向心肌细胞分化的影响。方法从形态和细胞免疫荧光、碱性磷酸酶试验以及HE染色鉴定m ESC的多能性。采用悬滴法培养m ESC形成拟胚体(EB),自分化为跳动的心肌细胞,通过细胞免疫荧光和透射电镜(TEM)方法鉴定。慢病毒分别携带h TNNI3K基因和siRNA感染m ESC,并分别自分化为心肌细胞,通过流式细胞术(FCM)、细胞免疫荧光、Western blot等分析心肌特异性蛋白表达水平的差异。结果 m ESC表面蛋白分子SSEA-1和Oct-4表达呈阳性(绿色),ALP试验呈蓝紫色,核质比1。正常自分化的细胞免疫荧光显示cTnⅠ、cTnT、MLC2以及α-actinin阳性(绿色),肌节清晰可见。TEM显示心肌细胞独有的肌纤维亚细胞结构。过表达组cTnT+阳性细胞率高于对照组,Western blot显示心肌特异性蛋白cTnT、cTnⅠ、MLC2、α-actinin等显著高于对照组,且细胞免疫荧光结果显示MHC6蛋白提前表达。干扰组不仅cTnT+阳性细胞率显著低于对照组,而且心肌特异蛋白也显著低于对照组,MHC6蛋白表达延后。结论TNNI3K基因能增强心肌细胞的生成,促进m ESC向心肌细胞的分化。
【作者单位】： 中国医学科学院北京协和医学院国家心血管病中心阜外医院心血管疾病国家重点实验室血脂异常与心血管病诊治中心;中国医学科学院北京协和医学院国家心血管病中心阜外医院心血管疾病国家重点实验室;
【关键词】： 小鼠胚胎干细胞 肌钙蛋白Ⅰ相关激酶 心肌细胞
【基金】：教育部高等学校博士学科点专项科研基金(20101106120007) 国家自然科学基金(81100118)
【分类号】：R542.22
【正文快照】： 目前,伴随着社会人口的老龄化,心肌梗死(myocardial infarction,MI)发病率逐年增高[1]。MI常规治疗手段,如溶栓治疗及冠状动脉旁路移植术,均难以逆转其心脏功能。心脏移植术也因供体来源、免疫排斥等因素而受限制。细胞移植是治疗MI的新方法,近年来受到关注[2]。骨髓间充质干

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本文编号：517850