荧光PCR和数字PCR法检测转基因DAS-44406-6品系大豆

发布时间：2017-07-17 08:35

  本文关键词：荧光PCR和数字PCR法检测转基因DAS-44406-6品系大豆

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【摘要】：目的:建立实时荧光聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)检测转基因DAS-44406-6品系大豆的定性检测方法和使用数字PCR检测转基因DAS-44406-6品系大豆的定量检测方法。方法:针对转基因DAS-44406-6大豆品系,进行5’-RACE,测定该品系转基因大豆外源片段与大豆染色体重组的边界序列,并根据该边界序列设计引物和探针。使用23种非DAS-44406-6品系转基因植物作为阴性对照测试实时荧光PCR引物和探针的特异性,以DAS-44406-6品系样品制备6个含量梯度的样品进行检测低限实验。使用数字PCR技术进行定量检测,并确定定量检测的低限。结果:建立的转基因DAS-44406-6大豆品系的实时荧光PCR特异性检测方法品系鉴定特异性较强,实时荧光PCR检测方法的检测低限在模板DNA浓度为100 ng/反应时,为0.01%的转基因大豆含量,约为16.6个拷贝的DAS-44406-6基因组DNA;数字PCR检测方法的检测低限在模板DNA浓度为0.5 ng/反应、转基因大豆含量为1%时,相对标准偏差为0.7%。因此,建立的转基因DAS-44406-6大豆品系实时荧光PCR和数字PCR特异性检测方法符合转基因检测的要求。
【作者单位】： 青岛大学生命科学学院;山东出入境检验检疫局检验检疫技术中心;
【关键词】： 转基因大豆 DAS--品系 品系鉴定 实时荧光PCR 数字PCR
【基金】：公益性行业(质检)科研专项(201410014)
【分类号】：S565.1
【正文快照】： 引文格式:于晓帆,高宏伟,孙敏,等.荧光PCR和数字PCR法检测转基因DAS-44406-6品系大豆[J].食品科学,2016,37(16):235-241.DOI:10.7506/spkx1002-6630-201616038.http://www.spkx.net.cnYU Xiaofan,GAO Hongwei,SUN Min,et al.Detection of genetically modified soybean event

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本文编号：552784