中华蜜蜂SRP9基因的克

发布时间：2017-07-20 14:05

  本文关键词：中华蜜蜂SRP9基因的克隆、序列分析及原核表达

  更多相关文章： 中华蜜蜂 SRP 基因克隆 序列分析 结构预测 原核表达

【摘要】：【目的】探究中华蜜蜂Apis cerana cerana信号识别颗粒9(signal recognition particle 9,SRP9)基因的序列,获得纯化的重组蛋白,为探究其蛋白功能奠定基础。【方法】利用RT-PCR方法,以中华蜜蜂的c DNA为模板扩增中华蜜蜂SRP9基因编码区,并通过软件MEGA5.1构建系统发育树,运用Predice Protein和SWISS-MODEL等软件预测分析蛋白结构;用大肠杆菌Escherichia coli表达系统进行原核表达;采用尿素洗脱法进行重组蛋白纯化。【结果】扩增得到的中华蜜蜂SRP9基因编码区长为237 bp,命名为Acc SRP9。该基因编码78个氨基酸,编码蛋白的相对分子量为9.36 k D,等电点为9.17。系统进化树分析表明,Acc SRP9与西方蜜蜂Apis mellifera的SRP9和小蜜蜂Apis florea的SRP9聚成一支。蛋白质二级结构预测发现其含有2个α-螺旋区和3个β-折叠区。利用同源建模获得蛋白质的三维结构。将Acc SRP9连入表达载体p GEX-6P-1并在BL21(DE3)中进行原核表达,发现该重组蛋白表达在包涵体中,经蛋白纯化,最终获得了N端带GST标签的重组蛋白p GEX-6P-1-SRP9。【结论】本研究成功克隆了中华蜜蜂SRP9基因Acc SRP9,对其序列进行了分析,并获得了带有标签的重组蛋白,为进一步研究该基因的功能提供参考和材料。
【作者单位】： 中国农业科学院蜜蜂研究所农业部授粉昆虫生物学重点实验室;中国农业科学院北京畜牧兽医研究所;
【关键词】： 中华蜜蜂 SRP 基因克隆 序列分析 结构预测 原核表达
【分类号】：Q966
【正文快照】： 人类首次分离得到了信号识别颗粒(signalrecognition particle,SRP)是在20世纪80年代(Walter and Blobel,1980),研究表明,SRP是普遍存在于各生物细胞质中的一种核糖核酸-蛋白复合物,在蛋白转运系统中发挥重要作用(Walter andBlobel,1980;Tozik et al.,2002;李菁菁,2012)。SRP

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