融合PCR结合同源重组技术敲除白色假丝酵母菌FLO8基因

发布时间：2017-07-26 12:02

  本文关键词：融合PCR结合同源重组技术敲除白色假丝酵母菌FLO8基因

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【摘要】：目的运用融合PCR和同源重组技术敲除白色假丝酵母菌FLO8基因,并初步分析敲除菌株药物敏感性(药敏)情况。方法运用融合PCR将FLO8基因的上下游片段与筛选标记融合在一起构成同源敲除组件,再用高效醋酸锂转染法将敲除组件转染入白色假丝酵母菌SN152,在营养缺陷板上进行筛选,通过2次同源重组敲除FLO8的2条等位基因。采用点板法比较FLO8未敲除株与敲除株药敏情况。结果成功构建白色假丝酵母菌SN152 FLO8双等位基因缺失株,且耐药性FLO8~(-/-)FLO8~(+/-)SN152。结论融合PCR结合同源重组技术能高效、快速构建白色假丝酵母菌FLO8基因缺失株,白色假丝酵母菌FLO8基因与药敏相关,且FLO8拷贝数越少耐药性越强。
【作者单位】： 上海交通大学医学院附属瑞金医院检验科;上海交通大学医学院附属瑞金医院卢湾分院放免检验科;
【关键词】： 白色假丝酵母菌 FLO基因 基因敲除 耐药性
【基金】：上海市科委基金(15ZR1426900) 上海市医学重点专科建设项目(ZK2012A21) 上海市黄浦区优秀青年人才(RCPY1407)~~
【分类号】：R440
【正文快照】： 上海200020二相性真菌白色假丝酵母菌是最常见的机会性致病菌,能够引起人类多部位,甚至系统性假丝酵母菌病[1-2]。据调查,曾患有假丝酵母菌性外阴阴道炎并被确诊至少1次的女性比例近75%[3]。近年来,由于免疫功能缺陷患者不断增多,由白色假丝酵母菌引起的假丝酵母菌病也成为日

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本文编号：576260