新疆野生扁桃花粉PetSSK1基因的克隆与表达及功能初步分析

发布时间：2017-07-30 16:23

  本文关键词：新疆野生扁桃花粉PetSSK1基因的克隆与表达及功能初步分析

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【摘要】：新疆野扁桃(Amygdalus Ledebouriana Schlech)又称野巴旦杏,是蔷薇科李亚科桃属扁桃亚属的落叶灌木,是第三纪中新世的孑遗落叶树种,有植物界“活化石”之称。由于野扁桃林遭受病虫害,以及人为的破坏,所以加强其研究和科学保护显得十分重要。本研究分别采集新疆境内裕民,塔城,托里,布尔津,哈巴河共5个居群的单株,总计150份材料,利用同源克隆技术,从中选择一个基因型的野扁桃自交不亲和相关基因SSK1进行克隆,并通过生物信息学软件对克隆得到的基因进行分析,然后通过构建矮牵牛遗传转化体系,对野扁桃自交不亲和基因SSK1进行功能验证;以期本研究能为野扁桃的保护,以及为今后研究其自交不亲和机理提供一个参考。主要研究结果如下:1.本试验以新疆野扁桃植物叶片及花粉为试验材料采用Rt-PCR以及生物测序等技术,克隆得到了一个新的SSK1基因全长cDNA,将之命名为PetSSK1(NCBI收录号为:KT984123)。PetSSK1全长为602 bp,开放阅读框为534 bp,共编码了177个氨基酸,经生物信息学分析,PetSSK1蛋白的分子式为C910H1421N233O295S6,相对分子质量为20 538.0,理论推导半衰期为30 h,等电点为4.52,不稳定指数为41.48,平均疏水指数为-0.567,PetSSK1蛋白属于水溶性不稳定蛋白。首次从新疆野扁桃植株中克隆得到了SSK1基因全长。2.通过对矮牵牛再生体系的建立以及优化,得到矮牵牛最适宜的种子灭菌方法是:75%酒精处理30s,0.1%升汞处理6min,矮牵牛最适宜的诱导不定芽生长的培养基为MS+2.0mg/L 6-BA+0.2mg/L NAA,最适宜的生根培养基为?MS+0.4 mg/L IBA,最终通过炼苗,定植得到生长良好的矮牵牛幼苗。3.构建野扁桃自交不亲和性相关基因PetSSK1的植物表达载体pCAMBIA1303-PetSSK1,采用根癌农杆菌介导法,将该基因导入矮牵牛,并研究了不同种类及浓度抗生素对矮牵牛再生的影响。结果表明:成功获得转化新疆野扁桃自交不亲和相关基因PetSSK1的矮牵牛植株,并筛选出矮牵牛的卡那霉素(Kan)和头孢霉素(Cef)的敏感浓度分别为25 mg/L、300 mg/L,并进一步通过PCR分子检测确认其为转基因阳性植株。
【关键词】：野扁桃 自交不亲和 PetSSK1基因 矮牵牛 转基因
【学位授予单位】：新疆农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：S662.9
【目录】：

• 摘要4-5
• Abstract5-8
• 第1章 绪论8-20
• 1.1 野扁桃概述8-9
• 1.2 植物自交不亲和研究进展9-13
• 1.3 自交不亲和的作用机理13-15
• 1.4 SCF复合体降解模型15-17
• 1.5 蔷薇科自交不亲和性研究现状17-19
• 1.6 本研究的目的意义19-20
• 第2章 新疆野扁桃自交不亲和基因Pet SSK1的克隆及生物信息学分析20-33
• 2.1 材料和方法20-23
• 2.2 结果与分析23-32
• 2.3 讨论32
• 2.4 小结32-33
• 第3章 矮牵牛再生体系的建立及优化33-39
• 3.1 试验材料与试验方法33-34
• 3.2 试验方法34-36
• 3.3 结果与分析36-38
• 3.4 讨论38
• 3.5 小结38-39
• 第4章 根癌农杆菌介导矮牵牛新疆野扁桃Pet SSK1基因遗传转化体系建立39-50
• 4.1 试验材料与试验方法39-45
• 4.2 结果与分析45-48
• 4.3 讨论48-49
• 4.4 小结49-50
• 第5章 结论与展望50-51
• 5.1 结论50
• 5.2 后期工作50-51
• 参考文献51-57
• 附录57-60
• 致谢60-61
• 作者简介61

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1 夏江宏;新疆野生扁桃花粉PetSSK1基因的克隆与表达及功能初步分析[D];新疆农业大学;2016年

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本文编号：595121