慢病毒介导稳定表达FRT-LacZ基因的MDCK细胞株构建

发布时间：2017-07-30 19:15

  本文关键词：慢病毒介导稳定表达FRT-LacZ基因的MDCK细胞株构建

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【摘要】：[目的]通过慢病毒载体系统获得稳定表达FRT-LacZ基因的MDCK细胞株。[方法]PCR扩增FRT-LacZ基因,亚克隆至慢病毒载体p LVX-PGK-Puro。经四质粒包装系统共转染293FT细胞包装重组慢病毒并检测病毒滴度,获得的慢病毒感染MDCK细胞,经嘌呤霉素筛选和β-半乳糖苷酶原位染色检测筛选鉴定转基因细胞株。[结果]测序证实,成功构建重组慢病毒质粒p LVX-FRT-LacZ-PGK-Puro。包装产生的慢病毒滴度为4.04×107TU/m L,重组慢病毒感染MDCK细胞后筛选获得稳定表达FRT-LacZ基因的MDCK细胞株。[结论]构建了稳定表达FRTLacZ基因的MDCK细胞株。
【作者单位】： 西北民族大学生命科学与工程学院;西北民族大学医学院;甘肃省动物细胞工程技术研究中心;
【关键词】： FRT-LacZ基因 慢病毒载体 MDCK细胞 位点特异性重组
【基金】：教育部创新团队发展计划(“动物医学生物工程创新团队”,No.IRT13091) 国家自然科学基金项目(“脂联素介导绵羊肌内、内脏和皮下脂肪细胞生脂的基因表达模式与分子调控”,No.31260533) 甘肃省自然科学基金项目(“绵羊脂联素及其受体基因表达模式研究”,No.1208RJZA188) 甘肃省科技支撑计划项目(“CHO基因工程细胞株构建及其生物反应器悬浮培养研究”,No.1204FKCA182) 校企合作项目(“应用基因工程技术构建MDCK悬浮细胞应用于疫苗生产”,No.h2011-19) 西北民族大学研究生科研(实践)创新项目(“新型γ-PGA高效工程菌株构建”,No.Yxm2014188)资助
【分类号】：Q78
【正文快照】： 利用哺乳动物细胞表达外源基因生产药用蛋白、单克隆抗体和疫苗是生物制药工业的主要发展方向,但哺乳动物细胞的表达水平较低、获得高表达工程细胞株所需时间长、细胞大规模培养成本高等因素导致哺乳动物细胞生产蛋白类药物的成本较高。因此,建立哺乳动物细胞高效表达体系包括

【共引文献】

中国硕士学位论文全文数据库 前2条

1 袁婷;慢病毒载体介导的RNAi靶向沉默HSP70基因对淋巴瘤细胞凋亡的影响[D];山东大学;2011年

2 孙国锋;慢病毒介导eGFP转基因鸡的研究[D];西北农林科技大学;2014年

【二级参考文献】

中国期刊全文数据库 前1条

1 许辰煜,程通,卢五迅,陈敏,吴婷,王颖彬,张军,夏宁邵;杆状病毒对不同哺乳动物细胞基因转移及表达效率的研究[J];生物工程学报;2004年01期

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本文编号：595759