小麦TaGAPC定点突变体基因载体构建及其原核表达

发布时间：2017-07-31 02:04

  本文关键词：小麦TaGAPC定点突变体基因载体构建及其原核表达

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【摘要】：为了研究催化活性半胱氨酸Cys154、Cys158残基对小麦细胞质甘油醛-3-磷酸脱氢酶(Ta GAPC)蛋白酶活性的影响,利用重叠延伸PCR法分别将这2个位点的半胱氨酸突变成丝氨酸,并分别连入p ET28a(+)原核表达载体。在25℃条件下,Ta GAPC及其定点基因Ta Cys154S/Ta Cys158S经0.25 mmol/L IPTG诱导后高效表达,SDS-PAGE电泳检测结果显示,目标重组蛋白均为可溶性且大小约为40 k Da,与预测结果一致。在此基础上,经超声波破菌及镍柱纯化获得3种纯化重组蛋白。这为后续Ta GAPC及其定点突变体蛋白酶活性测定及活性位点分析提供试验材料。
【作者单位】： 西北农林科技大学生命科学学院;西北农林科技大学黄土高原土壤侵蚀与旱地农业国家重点实验室;
【关键词】： Ta GAPC 重叠延伸PCR 定点突变 原核表达 蛋白纯化
【基金】：国家自然科学基金项目(31271625) 黄土高原土壤侵蚀与旱地农业国家重点实验室专项(10502)
【分类号】：S512.1
【正文快照】： 甘油醛-3-磷酸脱氢酶(Glyceraldehyde-3-phos-phate dehydrogenase,GAPDH)作为糖酵解反应的一种关键酶,在烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(辅酶Ⅰ)和无机磷酸盐存在的情况下,催化3-磷酸-甘油醛氧化生成1,3-二磷酸甘油醛[1]。GAPDH普遍存在于原核和真核生物中,具有高度种属保守序列[2-3]

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1 张晓梅;王宇枭;王禄山;陈冠军;刘巍峰;高培基;;白腐真菌中锰过氧化物酶的体外转录表达系统的建立及相关定点突变体的研究[A];2008年中国微生物学会学术年会论文摘要集[C];2008年

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本文编号：596968