融合β-甘露聚糖酶基因的构建、表达及酶学性质的分析

发布时间：2017-08-04 21:37

  本文关键词：融合β-甘露聚糖酶基因的构建、表达及酶学性质的分析

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【摘要】：宇佐美曲霉(Aspergillus usamii)YL-01-78的糖苷水解酶5家族β-甘露聚糖酶(Au Man5A)是一种仅含催化域(CM)的单结构蛋白。为改善其酶学性质,基于理性设计将海栖热胞菌(Thermotoga maritima)MSB8的27家族碳水化合物结合域(CBM27)融合至Au Man5A的C-端,并采用重叠PCR技术构建融合酶基因Auman5A-cbm27。分别将Auman5A-cbm27和Auman5A在毕赤酵母GS115中进行表达,对重组表达产物re Au Man5A-CBM27和re Au Man5A进行纯化和酶学性质测定。结果表明,re Au Man5A-CBM27和re Au Man5A的最适温度均为68℃;两者分别在68和60℃及以下稳定。同时,前者较后者具有更广泛的p H稳定范围。re Au Man5ACBM27对角豆胶的Km值由融合前的1.7 mg/m L降至0.7 mg/m L,表明Au Man5A的底物亲和力得到了提高。
【作者单位】： 江南大学食品学院;江南大学无锡医学院;
【关键词】： β-甘露聚糖酶 催化域 碳水化合物结合域 热稳定性 底物亲和力
【基金】：国家自然科学基金项目(31271811)
【分类号】：Q55;Q78
【正文快照】： Analysis of a Fusionβ-Mannanaseβ-甘露聚糖酶是内切β-1,4-D-甘露聚糖酶(endo-β-1,4-D-mannanase,EC 3.2.1.78)的简称,根据其一级结构和疏水簇分析,几乎所有β-甘露聚糖酶可归为糖苷水解酶5、26和113家族(http://www.cazy.org/fam/acc_GH.html)[1]。β-甘露聚糖酶广泛存

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