湖羊多胎性状候选基因BMPR-IB多态性研究及检测技术优化

发布时间：2017-08-07 14:34

  本文关键词：湖羊多胎性状候选基因BMPR-IB多态性研究及检测技术优化

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【摘要】：湖羊是世界著名的多胎绵羊品种。已有研究表明BMPR-IB基因与绵羊的排卵数和高繁殖力有密切关系。FecB基因是由6号染色体上的BMPR-IB基因编码区发生单核苷酸突变(A746G)形成的。为探究湖羊多胎的内在原因,本研究使用PCR-RFLP技术与实时荧光定量PCR的方法分别研究了繁殖力较低湖羊(单羔组)和繁殖力较高湖羊(多羔组)的单核苷酸多态性与拷贝数变异情况。本研究深入探讨了BMPR-IB基因突变与湖羊多胎性状之间联系,为揭示湖羊高繁多胎机理提供了参考。本研究主要着力于探究BMPR-IB基因与湖羊多胎性状的关联并优化已有的FecB基因检测技术用于推广。研究结果如下:1.采集51只经产湖羊的血样,使用酚-氯仿法提取基因组DNA。再以BMPR-IB基因为研究对象,使用PCR-RFLP法进行单核苷酸多态性(SNP)分析,并结合生产记录,研究湖羊多胎与BMPR-IB突变的关联。研究发现,湖羊为Fec B(BMPR-IB突变)基因高度纯合的群体,试验群体中Fec B基因频率为90%,未发现野生型个体,高产湖羊(39头)均为FecB基因纯合个体。研究表明该基因突变可用于湖羊高产个体的早期选择。2.使用荧光定量PCR的方法分析BMPR-IB基因的拷贝数变异情况,并结合生产记录,研究湖羊多胎与BMPR-IB基因拷贝数变异的联系。研究发现,BMPR-IB基因在不同湖羊个体间存在拷贝数变异,却未发现其与湖羊产羔性状之间的显著关联。但产羔平均数大于3的湖羊群体中,FecB基因相对拷贝数均大于0.75。3.采集38只经产湖羊的血样与羊毛样品,使用酚-氯仿法提取基因组DNA,使用蛋白酶K制备羊毛毛囊DNA消化液,同上分别进行SNP检测并对比羊毛与羊血的检测结果。经优化后,采用羊毛毛囊制备的消化液可以快速简便地进行基因分型,便于推广。综上,本研究发现FecB基因纯合可作为湖羊多胎的分子标记。由于采集绵羊的血样过程繁琐,不易运输,导致该技术难以在养羊生产实践中推广应用。本研究发现可使用毛囊样品替代血样进行FecB基因检测,样品运输便利,因而本研究成果在生产实践中容易推广应用。
【关键词】：BMPR-IB基因 湖羊 多胎 拷贝数变异 荧光定量PCR
【学位授予单位】：西北农林科技大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：S826
【目录】：

• 摘要6-7
• abstract7-11
• 文献综述11-19
• 第一章 绵羊多胎及BMPR-IB基因研究进展11-19
• 1.1 绵羊多胎性状研究综述11-14
• 1.1.1 绵羊多胎现象11-12
• 1.1.2 绵羊多胎研究进展12-13
• 1.1.3 湖羊—我国特有的高繁殖力绵羊品种13
• 1.1.4 湖羊与多胎基因13-14
• 1.2.BMPR-IB基因研究综述14-18
• 1.2.1 BMP/Smad信号通路14-15
• 1.2.2 BMPR-IB基因的研究进展15-16
• 1.2.3 拷贝数变异与绵羊多胎16-18
• 1.3 试验目的及研究意义18-19
• 试验研究19-39
• 第二章 BMPR-IB基因的单核苷酸突变与湖羊多胎性状的关联分析19-26
• 2.1 材料与方法19-21
• 2.1.1 试验材料19
• 2.1.2 试验仪器19-20
• 2.1.3 试验方法20-21
• 2.2.结果分析21-24
• 2.2.1 目的片段扩增结果21-22
• 2.2.2 PCR产物酶切结果22
• 2.2.3 基因频率和基因型频率22-23
• 2.2.4 基因型与湖羊产羔性状的关联分析23
• 2.2.5 不同繁殖力湖羊与其基因型的关联23-24
• 2.3 讨论24-25
• 2.3.1 湖羊为FecB基因高度纯合的绵羊品种24
• 2.3.2 FecB基因是湖羊具有多胎性能的基础24-25
• 2.4 小结25-26
• 第三章 BMPR-IB基因的拷贝数变异与湖羊多胎性状的关联分析26-34
• 3.1 材料与方法26-29
• 3.1.1 试验材料26
• 3.1.2 试验方法26-29
• 3.2 结果分析29-33
• 3.2.1 标准曲线29-30
• 3.2.2 拷贝数检测结果30-31
• 3.2.3 BMPR-IB基因拷贝数变异分布31
• 3.2.4 不同繁殖力湖羊之间BMPR-IB基因拷贝数变异情况31-32
• 3.2.5 FecB基因拷贝数与产羔性状的关联32-33
• 3.3 讨论33
• 3.4 小结33-34
• 第四章 FecB基因检测技术的优化34-39
• 4.1 材料与方法34-36
• 4.1.1 试验材料34
• 4.1.2 试验方法34-36
• 4.2 结果分析36-38
• 4.2.1 FecB基因基因型检测结果36-37
• 4.2.2 毛囊消化液为模板进行PCR反应的结果37
• 4.2.3 羊毛毛囊RFLP分析结果37-38
• 4.3 讨论38
• 4.4 小结38-39
• 结论与创新点39-40
• 参考文献40-44
• 附录44-49
• 致谢49-50
• 作者简介50

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本文编号：635211