蛋白激酶Cβ基因单核苷酸多态性及血浆表达水平与系统性红斑狼疮发病的相关性研究

发布时间：2017-08-07 15:38

  本文关键词：蛋白激酶Cβ基因单核苷酸多态性及血浆表达水平与系统性红斑狼疮发病的相关性研究

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【摘要】：研究背景系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)是一种以多种自身抗体产生和多器官损害为特征的自身免疫性疾病,其临床表现复杂,病程迁延反复,对患者身心健康造成较大影响,已成为一个重要的公共卫生问题。已有研究表明SLE的发生与T、B淋巴细胞的高度活化、免疫球蛋白增多等机体的免疫异常有关,其中以B细胞增殖分化和功能异常最为突出。B细胞通过产生大量的自身抗体介导组织和器官损伤,递呈抗原给自身反应性T细胞,以及产生可溶性介质触发、维持炎症反应,参与SLE发病机制的多个环节。核转录因子κB(nuclear factorκB,NF-kB)是参与细胞内信号转导的重要转录因子,对T细胞的活化、增殖以及调节B细胞免疫球蛋白基因的表达起着关键作用。已有证据显示,B细胞受体(B cell receptor,BCR)介导的NF-kB信号通路的激活参与了SLE的发病。蛋白激酶C(protein kinase Cβ,PKCβ)是BCR介导的NF-kB信号通路中的关键因子,可以通过BCR介导的NF-kB信号通路的激活,对成熟B细胞的存活起重要作用。B淋巴细胞瘤x L(B-cell lymphoma x L,Bcl-x L)和B淋巴细胞瘤2(B-cell lymphoma 2,Bcl-2)是Bcl-2蛋白家族的两个成员,均具有抑制细胞凋亡的作用。已有研究表明NF-kB可以诱导抗凋亡蛋白Bcl-2、Bcl-x L等表达失调,PKCβ缺陷的B细胞存活时间短也与Bcl-2、Bcl-x L的表达失调有关。同时,Bcl-2、Bcl-x L还可以通过影响B细胞功能造成大量自身免疫性抗体堆积,参与SLE的发病过程。目前已有在中国华中、华南地区4199例SLE病人和8255例健康对照中的研究表明,PKCβ基因多态性位点rs16972959与SLE遗传易感性相关,但缺少在皖籍汉族人群中的报道,且未研究rs16972959基因频率与SLE相关临床表现、实验室指标等疾病特征之间的关系。因此,本研究拟分析皖籍汉族SLE患者及健康对照者PKCβ基因多态性位点rs16972959与SLE遗传易感性之间的关联。同时,采用ELISA方法检测SLE患者和健康对照中PKCβ、Bcl-x L和Bcl-2血浆表达水平,比较两组间差异,探讨三者血浆表达水平之间的关系,并结合临床特征,分析PKCβ、Bcl-x L和Bcl-2血浆表达水平与SLE疾病活动度及不同临床表现和实验室指标之间的关系。第一部分蛋白激酶Cβ基因单核苷酸多态性与系统性红斑狼疮的关联性研究目的比较SLE患者和健康对照PKCβ基因单核苷酸多态性位点(rs16972959)基因型和等位基因频率的差异,探讨其与SLE遗传易感性的关系。同时结合临床特征,分析其与SLE主要临床表现和实验室指标之间的关系。方法本研究共纳入SLE病例400例,均来自安徽医科大学第一附属医院和附属省立医院风湿免疫科,诊断标准符合美国风湿病学会1997年修订的SLE分类标准。纳入健康对照400例,来自安徽医科大学第一附属医院健康体检中心健康志愿者。采用Taq Man探针基因分型技术检测SLE病例组和健康对照组PKCβ基因位点rs16972959的基因型和等位基因频率,结果采用SPSS 10.01软件进行统计分析,使用χ2检验或确切概率法比较SLE病例组和健康对照组基因型和等位基因频率的分布差异。检验水准α=0.05。结果(1)哈迪-温伯格检验:对照组基因分型的结果符合哈迪-温伯格平衡(χ2=1.523,P=0.217)。(2)PKCβ(rs16972959)基因分型:SLE患者组rs16972959位点基因A/A,A/G和G/G的基因型频率分别为3.75%,33.75%和62.50%,对照组分别为8.00%,36.75%和55.25%,两组基因型的分布差异具有统计学意义(χ2=13.816,P0.001)。对两组间等位基因频率进行比较发现,PKCβ-34277227A/G(rs16972959)最小等位基因A的基因频率在SLE病例组和对照组间分别为20.63%和26.37%,差异具有统计学意义(χ2=7.356,P=0.007)。(3)基因分型与主要临床症状的关联:rs16972959基因位点A/A,A/G和G/G的基因型分布与蝶形红斑、盘状红斑、光敏感、口腔溃疡、关节炎、浆膜炎、肾脏病变和血液学异常均无统计学关联(均有P0.05)。(4)基因分型与主要实验室指标的关系:rs16972959基因位点A/A,A/G和G/G的基因型分布与抗核抗体、抗双链DNA抗体、抗Sm抗体、抗SSA抗体、抗SSB抗体和抗核糖核蛋白抗体之间均无统计学关联(均有P0.05)。而rs16972959基因型分布在抗核糖体P蛋白抗体阳性组和阴性组之间的差异有统计学意义(χ2=6.361,P=0.042)。结论该研究人群中PKCβ基因单核苷酸多态性(rs16972959)与SLE的遗传易感性有关,rs16972959位点的G等位基因与该人群SLE的发病风险升高有关。第二部分蛋白激酶Cβ血浆表达水平与系统性红斑狼疮发病的相关性研究目的比较SLE病例组与健康对照组、SLE肾炎组与非肾炎组以及活动期SLE病例与非活动期SLE病例之间血浆PKCβ,Bcl-x L和BCL-2表达水平的差异,分析PKCβ,Bcl-x L和BCL-2表达水平之间的相关性以及三者表达水平与SLE临床表现和实验室指标之间的关系。方法选取80例安徽医科大学第一附属医院和附属省立医院风湿免疫科确诊的SLE患者作为病例组,收集一般情况、临床资料和实验室资料。所有的患者均符合1997年修订的SLE分类标准。选取80例安徽医科大学第一附属医院健康体检中心健康志愿者作为对照组,收集一般情况资料。采用ELISA试剂盒分别检测PKCβ、Bcl-x L和BCL-2的血浆表达水平。采用两独立样本t检验比较分析病例组与对照组PKCβ、Bcl-x L和BCL-2血浆表达水平之间的差异。使用SPSS 10.01软件进行统计学分析,检验水准α=0.05。结果(1)SLE病例组和健康对照组血浆中PKCβ的表达水平差异无统计学意义(t=0.62,P=0.535);SLE病例组Bcl-x L血浆表达水平低于对照组,差异有统计学意义(t=6.00,P0.001);Bcl-2在SLE病例组中的血浆表达水平高于对照组,差异有统计学意义(t=2.18,P=0.031)。(2)SLE病例组和对照组血浆中PKCβ表达水平与Bcl-x L和Bcl-2表达水平之间均无统计学关联(均有P0.05),SLE病例组中Bcl-x L与Bcl-2血浆表达水平之间也无统计学关联(rs=0.035,P=0.820),而对照组Bcl-x L与Bcl-2血浆表达水平呈负相关(rs=-0.342,P=0.007)。(3)SLE相应临床表现阳性组与阴性组之间PKCβ、Bcl-x L和Bcl-2血浆表达水平差异均无统计学意义(均有P0.05)。(4)SLE不同实验室指标与PKCβ和Bcl-2血浆表达水平之间均无统计学关联(均有P0.05);Bcl-x L血浆表达水平与C4、Ig G、Ig M之间具有统计学关联(P1=0.041,P2=0.024,P3=0.019),与其他各实验室指标之间均无统计学关联(均有P0.05)。结论SLE病例组和健康对照组血浆中PKCβ的表达水平差异无统计学意义,SLE病例组Bcl-x L血浆表达水平低于对照组,SLE病例组Bcl-2血浆浓度高于对照组,差异均有统计学意义。
【关键词】：系统性红斑狼疮 PKCβ 单核苷酸多态性 系统性红斑狼疮 PKCβ Bcl-xL BCL-2
【学位授予单位】：安徽医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R593.241
【目录】：

• 英文缩略词表6-7
• 中文摘要7-13
• 英文摘要13-19
• 第一部分 蛋白激酶Cβ基因单核苷酸多态性与系统性红斑狼疮的关联性研究19-37
• 1 前言19-20
• 2 材料与方法20-30
• 3 结果30-34
• 4 讨论34-36
• 5 结论36-37
• 第二部分 蛋白激酶Cβ血浆表达水平与系统性红斑狼疮发病的相关性研究37-60
• 1 前言37-38
• 2 材料与方法38-43
• 3 结果43-58
• 4 讨论58-59
• 5 结论59-60
• 参考文献60-64
• 附录64-67
• 致谢67-69
• 综述69-80
• 参考文献75-80
• 附件:调查表80-82

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