EB病毒编码miR-BART5作用于PUMA基因抑制肺癌细胞凋亡

发布时间：2017-08-12 20:14

  本文关键词：EB病毒编码miR-BART5作用于PUMA基因抑制肺癌细胞凋亡

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【摘要】：目的探讨肺癌组织中EB病毒(EBV)感染情况、EBV编码miR-BART5在肺癌组织中表达及对肺癌细胞凋亡的影响。方法采用实时荧光定量PCR技术检测非小细胞肺癌组织和肺良性病变组织中EBV DNA载量及EBV编码miR-BART5的表达情况;在宣威肺腺癌细胞系中构建PUMA基因和miR-BART5表达载体,利用荧光素酶报告系统验证PUMA与miR-BART5关系。使用噻唑蓝比色法(MTT)分析转染后不同时间段细胞增殖情况。通过caspase3/7、9活性检测研究miR-BART5、PUMA基因在肺癌细胞凋亡中的作用。结果 30例肺癌组织中EBV DNA阳性11例(36.67%),30例肺良性病变组织中均阴性。miRNA-BART5在EBV阳性肺癌组织中表达量(3.46±0.54)明显高于EBV阴性肺癌组织(1.98±0.46)和EBV阴性肺良性病变组织(1.12±0.32),差异有统计学意义(P均0.05);EBV阴性肺癌组织与EBV阴性肺良性病变组织中miRNA-BART5表达差异无统计学意义(P0.05)。荧光素酶报告基因分析显示,miR-BART5能够作用于PUMA基因3'UTR端。MTT结果显示,转染0、24、48、72 h后,miR-BART5组吸光度(A)值分别为0.8、0.93、1.18、1.2,细胞正常增殖;无意义序列(scrambled siRNA)转染组A值分别为0.71、0.80、0.90、0.99,生长未受到明显抑制;miR-BART5过表达(Over-miR-BART5)载体转染组A值为0.90、0.99、1.57、2.20,与miR-BART5组相比均增加;miR-BART5抑制表达(In-miR-BART5)载体转染组A值为0.70、0.67、0.56、0.48,与miR-BART5组相比,在转染24 h后出现明显抑制,且随时间的推移,抑制程度越明显;miR-BART5过表达载体转染组中caspase3/7、9活性(3 646±334、5 533±112)相对于miR-BART5抑制表达载体转染组中caspase3/7、9活性(10 145±398、10 576±915)显著降低。结论肺癌组织中EBV呈现较高的感染率;在EBV DNA阳性肺癌细胞中,miR-BART5可能通过抑制PUMA基因的表达进而抑制肺癌细胞凋亡。
【作者单位】： 昆明医科大学第一附属医院检验科;昆明医科大学第二附属医院检验科;昆明市盘龙区疾病预防控制中心检验科;
【关键词】： 肺癌 PUMA基因 miR-BART 荧光素酶
【分类号】：R734.2;R730.43
【正文快照】： to miR-BART5 group after 24 hour of transfection,and the degree of inhibition was more obvious with the extension of time.The activi-ties of caspase 3/7 and caspase 9 were decreased(3 646±334 and 5 533±112)in over-expression group and increased(10 145

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