枯草芽孢杆菌QM11漆酶基因克隆表达及序列分析

发布时间：2017-08-12 20:25

  本文关键词：枯草芽孢杆菌QM11漆酶基因克隆表达及序列分析

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【摘要】：为获得高效表达的产漆酶工程菌,将枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)的漆酶(cotA)基因在大肠杆菌中表达。用PCR的方法从枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)QM11基因组中扩增cotA基因,连接载体pET22b构建成表达载体pET22b-cotA,转化至E.coli BL21(DE3)进行诱导表达,最终通过SDS-PAGE检测蛋白表达情况。克隆得到的cotA基因含有1542个核苷酸,由513个氨基酸组成,预测相对分子量为58 ku,理论等电点为5.91,无信号肽,二级结构以β-折叠和无规卷曲为主,其中β-折叠占26.71%,无规卷曲占52.05%,与NCBI已公布的Bacillus subtilis漆酶cotA基因(Gen Bank:GQ184294.1)碱基序列有12个碱基的差异,其编码的氨基酸序列有4个发生了改变。通过SDS-PAGE检测,目标蛋白相对分子质量约为54 ku,与预测相对分子量基本相符。
【作者单位】： 哈尔滨商业大学食品工程学院;
【关键词】： 枯草芽孢杆菌 漆酶 基因克隆 序列分析 表达载体构建 诱导表达
【基金】：哈尔滨商业大学研究生创新科研项目(JYSCX2014-333HSD)
【分类号】：Q78;Q936
【正文快照】： 漆酶(EC 1.10.3.2)是一种含铜的多酚氧化酶,能够催化多种酚类化合物氧化,同时将分子氧还原为水[1],广泛应用于造纸及食品工业等。秸秆是我国主要的农业废弃物[2],主要由木质素、纤维素和半纤维素组成,秸秆降解的关键就是处理包裹在纤维素和半纤维素外面的木质素[3]。木质素是

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