蜜蜂NADPH-细胞色素P450还原酶基因在大肠杆菌中的表达及酶学特性分析

发布时间：2017-08-16 08:06

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【摘要】：10-羟基-2-癸烯酸(10-HDA)是蜂王浆中的主要脂肪酸成分,具有抗菌、抗癌、延缓衰老等多种生理活性,但目前关于10-HDA生物合成的分子机制还不清楚。通过克隆蜜蜂NADPH-细胞色素P450还原酶(EC 1.6.2.4,NADPH-cytochrome P450 reductase,CPR),在大肠杆菌中异源表达,并对其酶学特性进行分析。结果表明重组菌经IPTG诱导后表达蛋白的分子量与预期一致,为86.29 kDa,Ni-NTA亲和纯化后测得其比活性为77.33(EU of CPR)/μg。酶学性质分析结果表明蜜蜂CPR酶最适温度与pH分别为40℃和8.0,并对一些金属离子及有机溶剂具有不同程度的耐受性。其对底物细胞色素C的动力学参数Km和kcat分别为76μM和268/min。以上研究为探究CPR在10-HDA生物合成途径中的功能奠定理论基础。
【作者单位】： 山东省齐鲁工业大学生物工程学院;
【关键词】： NADPH-细胞色素P还原酶 大肠杆菌 异源表达 酶学特性
【基金】：国家自然科学基金(31201281,31171727) 山东省自主创新及成果转化专项(201422CX02602)资助项目
【分类号】：Q55;Q78
【正文快照】： NADPH(烟酰胺腺嘌呤二核苷酸)-细胞色素P450还原酶是一类以FMN(黄素单核苷酸)和FAD(黄素腺嘌呤二核苷酸)为辅基的氧化还原酶,是细胞色素P450酶系(Cytochrome P450 enzymes system,P450s)的重要组成部分[1],普遍存在于动物、微生物、昆虫及植物等生物体中。研究表明,动物、昆虫

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