苹果sMdCAX1基因超表达载体的构建及遗传转化

发布时间：2017-08-17 11:22

  本文关键词：苹果sMdCAX1基因超表达载体的构建及遗传转化

  更多相关文章： 苹果 s Md CAX基因 植物超表达载体 遗传转化

【摘要】：为使sMdCAX1基因能在苹果中高效表达,改善苹果对Ca~(2+)吸收转运的能力,本研究构建了sMdCAX1植物超表达载体并将其通过农杆菌介导法转入长富6号苹果中。根据MdCAX1基因序列设计引物,从长富6号中克隆MdCAX1基因,通过PCR方法截除编码MdCAX1基因的N末端序列,获得sMdCAX1片段。利用重叠PCR方法将sMdCAX1序列中的SacI位点进行定点突变,并在序列两端分别添加BamHI和SacI酶切位点,获得长度为1272bp的突变序列sMd1+2Mu。利用BamHI和SacI双酶切sMd1+2Mu和植物表达载体pYH4215,目的片段经回收、连接、转化和筛选,获得植物双元表达载体pYH4215-sMd1,并将该载体转化农杆菌菌株EHA105。以长富6号无菌试管苗叶片为受体,进行遗传转化获得了转基因植株,经鉴定,有6个株系呈GUS染色阳性,其中2个株系呈PCR阳性。进一步对PCR鉴定阳性的株系进行RT-PCR分析,表明sMdCAX1基因在这2个株系中得到表达。本试验结果为进一步研究苹果MdCAX1基因的功能和通过转基因方法提高苹果果实钙含量奠定了基础。
【作者单位】： 南京农业大学园艺学院/果树生物技术实验室;
【关键词】： 苹果 s Md CAX基因 植物超表达载体 遗传转化
【基金】：国家自然科学基金项目(31171935) 江苏省农业科技自主创新项目[CX(15)1022] 中央高校基本科研业务费专项基金(KYZ201310)
【分类号】：S661.1
【正文快照】： 苹果(Malus domestica Borkh.)是我国主要的经济水果之一,近年来环境污染以及土壤重金属化不断加重,使得苹果Ca2+流失增加,生理代谢紊乱,产量和品质不同程度的降低[1]。缺钙常常引起苹果果实果锈加重、痘斑病、苦痘病、水心病和贮藏期生理性病害等,因此提高苹果对Ca2+吸收及转

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前2条

1 米国桥;李继刚;贾永亮;;蚯蚓纤溶酶基因番茄表达载体的构建[J];河北农业大学学报;2008年06期

2 ;[J];;年期

中国硕士学位论文全文数据库 前2条

1 叶红红;番茄LeHB-1正反义果实特异表达载体的构建及对番茄的遗传转化[D];西北农林科技大学;2014年

2 许冬倩;番茄DR1基因植物超表达载体的构建及其转化番茄的研究[D];西南农业大学;2004年

，

本文编号：688739