6种重金属化合物对人Bel-7402肝癌细胞毒性及EGFP基因DNA甲基化的影响
本文关键词：6种重金属化合物对人Bel-7402肝癌细胞毒性及EGFP基因DNA甲基化的影响
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【摘要】：目的:以体外培养人Bel-7402肝癌细胞为模型,研究氯化铅(Pb Cl2)、乙酸铅(Pb(CH3COO)2)、硝酸铅(Pb(NO3)2)、氯化铜(Cu Cl2)、乙酸铜(Cu(CH3COO)2)、硝酸铜(Cu(NO3)2)等几种常见重金属化合物的细胞毒性和去甲基化表观遗传毒性。方法:应用MTS方法检测细胞的存活率,以前期研究建立的化学物去甲基化表观遗传毒性评价新方法评价化合物的去甲基化表观遗传毒性(使用DNA甲基化酶对p EGFP-C3质粒绿色荧光蛋白基因的启动子区进行甲基化修饰,随后将该质粒转染进人类Bel-7402肝癌细胞株,以所研究的化合物对上述转染后的Bel-7402细胞进行染毒处理,最后根据细胞绿色荧光强度和荧光阳性细胞比例来定性定量评价研究物质的去甲基化表观遗传毒性强弱,简称QDMP方法)。结果:所研究的6种化合物通过MTS实验显示均会抑制Bel-7402细胞的增殖。通过对同种重金属三种不同化合物类型的不同染毒浓度的细胞存活率进行配对设计t检验后显示,除了硝酸铅和乙酸铅对Bel-7402细胞存活率的影响有显著性差异外,其余各同种重金属不同化合物间的差异均无统计学意义。而不同种重金属间的差异具有统计学意义,其对Bel-7402细胞抑制能力为铜高于铅。去甲基化表观遗传毒性检测结果显示,Pb Cl2、Pb(CH3COO)2、Pb(NO3)2、Cu Cl2、Cu(CH3COO)2、Cu(NO3)2均可观察到明显的去甲基化表观遗传毒性,其相对于5-氮-2-脱氧胞苷(5-Aza-Cd R)的去甲基化表观遗传毒性当量分别为2.82E-03、1.50E-03、5.09E-04、3.31E-05、6.87E-05、3.45E-05。通过对同种重金属三种不同化合物类型的不同染毒浓度的去甲基化表观遗传毒性单量值进行配对设计t检验后显示差异均无统计学意义,而不同种重金属间的差异具有统计学意义,其去甲基化能力大小为铅高于铜。结论:铅和铜化合物均会使Bel-7402细胞的细胞存活率和转染进细胞的质粒上增强型绿色荧光蛋白基因启动子的DNA甲基化水平下降,但各重金属不同化合物盐类之间的去甲基化毒性无显著性差异。这表明铜和铅化合物的毒性与其所携带的阴离子关系不大,只与其重金属离子本身有关。不同种重金属之间,铜化合物对Bel-7402细胞抑制能力高于铅化合物,而铅化合物的去甲基化能力高于铜化合物。表明化合物对细胞的毒性作用与其致DNA甲基化的改变并没有绝对的关系。
【关键词】：铅 铜 Bel-7402细胞 去甲基化 MTS
【学位授予单位】：安徽医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R114
【目录】：
- 英文缩略词表5-6
- 中文摘要6-8
- 英文摘要8-10
- 1 引言10-13
- 2 材料与方法13-27
- 2.1 主要仪器与试剂13-16
- 2.2 化合物的细胞毒性检测16-18
- 2.3 化合物的去甲基化能力检测18-27
- 2.4 分析方法27
- 3 结果27-35
- 3.1 细胞毒性实验结果27-30
- 3.2 p EGFP-C3质粒甲基化处理效果30-31
- 3.3 各染毒化合物的去甲基化情况31-35
- 4 讨论35-37
- 5 结论37-38
- 参考文献38-43
- 附件43-45
- 附录45-47
- 致谢47-48
- 综述48-71
- 参考文献64-71
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，本文编号：715608
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