河川沙塘鳢TLR2基因的克隆及表达分析

发布时间：2017-08-24 12:39

  本文关键词：河川沙塘鳢TLR2基因的克隆及表达分析

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【摘要】：本研究以河川沙塘鳢(Odontobutis potamophila)为研究对象,采用RACE、实时荧光定量PCR等技术,首次对该鱼的TLR2基因进行了克隆和表达模式分析。主要研究结果如下:TLR2基因的c DNA全长序列为3 473 bp,包括2 631 bp开放阅读框(ORF)、75 bp的5'UTR区和767 bp的3'UTR区,并且具有脊椎动物典型的加尾信号AATAAA和26 bp的poly A尾巴,推测该序列编码876个氨基酸。蛋白结构预测表明TLR2蛋白的TIR结构域和LRR基序符合TLR家族的共同特征,其蛋白分子也存在多个功能位点。系统树中河川沙塘鳢与所有鱼类聚类为独立的分支,与鲈形目亲缘关系最近。应用RT-PCR法检测健康河川沙塘鳢鱼体中TLR2基因的m RNA组织表达差异情况。结果显示,TLR2基因在检测的12种组织中均有表达,在肝、肾、肠、血液和胃中都有较高的表达水平。人工感染嗜水气单胞菌后,对河川沙塘鳢3种主要免疫组织(脾、肾、肝)中进行不同时段表达量变化的检测,结果表明,TLR2基因在脾中感染后4 h表达水平发生下降,随后的24~48 h又上升,48 h时达到顶峰,72~96 h维持在略低于24 h水平上。在肾中,感染后表达水平持续上升,且24~96 h间保持相对稳定的表达水平。在肝组织中,感染后一直呈现上升趋势,72 h时达到顶峰,其他时段表达水平相差不大。可见TLR2在河川沙塘鳢抵御外源微生物侵染的先天免疫中发挥重要作用。
【作者单位】： 南京师范大学生命科学学院江苏省生物多样性与生物技术重点实验室;南京市水产科学研究所;
【关键词】： 河川沙塘鳢 TLR RT-PCR 表达分析
【基金】：江苏省科技支撑计划(农业)项目(BE2013441) “江苏省六大人才高峰”高层次人才项目(2012-NY-032) 南京师范大学科技成果转化基金项目(2013-02) 江苏省2015年度普通高校研究生实践创新计划项目(SJLX15_0300)共同资助
【分类号】：S917.4
【正文快照】： 河川沙塘鳢(Odontobutis potamophila)为我国特有的小型淡水底栖肉食性经济鱼类(伍汉霖等,1993),目前对河川沙塘鳢的研究主要集中在选育种和养殖等方面(张君等,2011;张丽娟等,2013;Zhu et al.,2014),对其免疫相关基因和抗病因子的研究未见报道。因此,开展河川沙塘鳢的免疫相关

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本文编号：731365