转基因作物pat蛋白的双抗体夹心酶联免疫检测方法研究.pdf

  本文关键词：转基因作物pat蛋白的双抗体夹心酶联免疫检测方法研究，由笔耕文化传播整理发布。

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第41卷2013年lO月分析化学(FENXI HUAXUE) 研究报告Chinese Journal of Analytical Chemistry第10期1555~1560DOI:10.3724/SP.J.1096.2013.30236转基因作物pat蛋白的双抗体夹心酶联免疫检测方法研究王敏1'2 张亮2 张威2 曹振2 谭桂玉2 南铁贵圯王保民砣1(北京工商大学理学院生物技术系,北京市植物资源重点实验室,北京100048)2(中国农业大学农学与生物技术学院,北京100093)摘要将克隆到的_Dot基因构建原核表达载体pET30(+)-pat并在大肠杆菌中进行表达,分离纯化得到高纯度Pm蛋白。用所得到的Pm蛋白制备了兔多克隆抗体和鼠单抗2F6。多抗效价>8000,单抗效价为5x104;单抗为IgGl类,轻链为K型。基于抗p耐蛋白单克隆抗体和兔多克隆抗体建立了双抗夹心酶联免疫分析方法(Sandwich ELISA)。检测范围为1.6—100¨g/L,线性回归方程y=0.6914x一2.572,决定系数为0.995l。用所建立的方法测定了5个转基因抗虫棉和2个非转基因棉花品种叶片中pat蛋白的含量,其中转基因抗虫棉中的3个品种检测出pat蛋白,其余均未检出pat蛋白。关键词转基因作物;pat基因;pat蛋白;双抗夹心酶联免疫检测法1 引言pat基因(Hosphinothricin acethl transferase)由菌株S.viridochromogenes中分离得到,其Bg/11一SsⅡ片段编码pa... 内容来自转载请标明出处.

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