实时荧光定量PCR技术在转基因玉米检测中的应用研究

  本文关键词：实时荧光定量PCR技术在转基因玉米检测中的应用研究，，由笔耕文化传播整理发布。

第30卷第6期2004年6月　602～607页

作　物　学　报

ACTAAGRONOMICASINICA

Vol.30,No.6

pp.602～607　June,2004

实时荧光定量PCR技术在转基因玉米检测中的应用研究

陈　颖1,3　徐宝梁1　苏　宁1　葛毅强2　王曙光1

Ξ

(1中国进出口商品检验技术研究所,北京100025;2科技部中国农村技术开发中心,北京100045)

摘　要　采用实时荧光定量PCR技术,通过使用特异的引物和探针,对玉米中的内源基因Invertase和转基因玉米Mon

810、Event176中的外源基因进行了定量检测,建立了商业化转基因玉米Mon810(YieldGard)和Event176(Maximizer)的定量PCR检测方法。该方法的检测灵敏度小于0.01%,是国际上设定的转基因最低限量的100倍。关键词　定量PCR技术;转基因玉米Mon810(YieldGard);转基因玉米Event176(Maximizer);转基因检测中图分类号:S513

Real2timeQuantitativePCRDetectionofGeneticallyModifiedMaximizer○Maize

R

andYieldGard○Maize

CHENYing1,3,XUBao2Liang1,SUNing1,GEYi2Qiang2,WANGShu2Guang1

(1ChinaImportandExportCommodityInspectionTechnologyInstitute,Beijing100025;2ChinaAgriculturalTechnologyDevelopmentCentre,Beijing100045,Chi2na)

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Abstract　AreliableandsimpleReal2timequantitativepolymerasechainreactionmethodfordetectionofgeneticallymodi2fiedmaizewithABIPrism7700wasestablishedinthispaper.AsetofPCRprimersandprobeswasdesignedspecifictotransgeniccommercialmaizeMon810andEvent176.Thedetectionlimitislessthan0.01%whichis100timeslowerthanlabelingthresholdofEuropeanUnion.

○

MOdetectionKeywords　Real2timequantitativePCR;YieldGard○MaizeMon810;MaximizerMaizeEvent176;G

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　　GMO(GeneticallyModifiedOrganism)食品对人类健康及生态环境的潜在影响日益受到关注,转基因产品标识已成为各国转基因产品监管的重要部分。已有欧盟、日本、韩国、澳大利亚、新西兰等多个国家和地区出台了对转基因生物产品实施强制性标签的制度,规定了食品中转基因成分含量的最低标识限量。挪威是第一个要求对转基因产品进行含量标识的国家,该国对转基因成分的限量标识低限为2%[1];而瑞士与欧盟规定的限量标识低限为1%[2,3],韩国、日本、泰国也有相应的转基因限量标

情权。因此,针对不断商品化的转基因产品建立相应的定性特别是定量检测方法,是进一步加强我国在转基因产品监管方面的重要技术保障。

实时荧光定量PCR技术(Real2timeFluorescenceQuantitativePCRDetection)是近年来定量PCR技术中

兴起的最新定量检测技术。在该技术体系中,除了有两条普通引物即与目标DNA特异序列相结合的引物外,还有一条在5′和3′端分别标记了报告荧光染料基团(R)和淬灭荧光染料基团(Q),并与PCR产物特异片段相结合的寡核苷酸探针。当探针完整时,R基团发出的荧光被Q基团所淬灭,一旦探针被切断,淬灭作用消失,R基团发出的荧光就可以被检测到。在PCR反应过程中,上下游引物与目标DNA的特异序列相结合,探针则与PCR产物相结合。在PCR延伸阶段中TaqDNA酶的5′—3′外切活性将

识法规,标识低限分别为3%、5%、3%～5%。我国于2002年1月5日颁布了《农业转基因生物标识管理办法》,该管理办法明确规定对转基因生物的标识管理就是为了规范农业转基因生物的销售行为,引导农业转基因生物的生产和消费,保护消费者的知

Ξ基金项目:科技部社会公益研究专项资金项目“进出口食物中转基因成分的检测研究”。

作者简介:陈颖(1972-),女,博士后/高级工程师,北京市朝阳区高碑店北路甲3号(100025)。Tel:010285753925(O)E2mail:yqychen@ya2

Received(收稿日期):2002212209,Accepted(接受日期):2003208212.

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