牦牛轮状病毒VP6基因序列分析及RT-PCR检测方法的建立与应用

发布时间：2017-08-26 00:00

  本文关键词：牦牛轮状病毒VP6基因序列分析及RT-PCR检测方法的建立与应用

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【摘要】：轮状病毒(rotavirus,RV)VP6基因是RV的主要分子检测靶点,但该基因的点突变会影响RV的分子检测。本试验的目的是在研究牦牛RVVP6基因遗传变异的基础上,建立检测牦牛RV的RT-PCR方法并应用于临床样本检测。采用Prime 5.0设计引物,从30个牦牛腹泻样本中扩增得到14个位于931—1 338bp牦牛RVVP6基因片段。序列分析结果发现,与牛轮状病毒(bovine rotavirus,BRV)相比,牦牛RVVP6基因在931—1 110bp间出现多处点突变,而在1 100—1 338bp之间序列高度保守。据此设计检测引物,成功建立了检测牦牛RV的RTPCR方法,具有良好的特异性和稳定性,只扩增出牦牛RV及BRV的特异片段,对其他无关病原无扩增;检测下限为0.45pg·μL~(-1),灵敏性较好。所建立方法对牦牛RV的检出率明显优于现有检测BRV的RT-PCR方法,为牦牛RV病的诊断和流行病学调查提供了可靠的方法;对BRV的检出也与其他方法具有很好的符合率,也可以用于BRV的检测。对234份犊牦牛腹泻粪便样本的RV检出率:西藏为60.00%(36/60)、青海为95.00%(57/60);四川为85.19%(46/54);云南为90.00%(54/60),证明牦牛RV感染是当前导致犊牦牛腹泻的重要原因。
【作者单位】： 西南民族大学生命科学与技术学院/四川省教育厅重大动物疫病防控技术创新团队;
【关键词】： 牦牛 轮状病毒 VP基因 点突变 RT-PCR
【基金】：“十二五”科技支撑计划项目(2012BAD13B06) 四川省科技计划项目青年基金(2014JQ0044)
【分类号】：S852.653
【正文快照】： 国内外研究表明,牛轮状病毒(bovine rotavir-us,BRV)是引起犊牛腹泻的主要病因,世界范围内流行,给全球养牛业带来巨大的经济损失[1-2]。BRV为呼肠孤病毒科轮状病毒属,无囊膜双链RNA病毒,分11个基因节段,由三层衣壳组成,分别编码6种结构蛋白(VP1~VP4、VP6、VP7)和6种非结构蛋白

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