中华绒螯蟹FAD6-b基因的全长克隆及原核表达分析

发布时间：2017-08-30 19:47

  本文关键词：中华绒螯蟹FAD6-b基因的全长克隆及原核表达分析

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【摘要】：根据已登录的中华绒螯蟹一种Δ6去饱和酶基因(Accession Number:JX946434)及菁夜蛾去饱和酶基因(Accession Number:KJ622055.1)的保守区设计引物,通过逆转录PCR以及RACE技术克隆了中华绒螯蟹另一种Δ6去饱和酶基因FAD6-b的全长序列。经序列分析,中华绒螯蟹FAD6-b cDNA全长为2 310 bp,其中开放阅读框(ORF)为1 326 bp,共编码442个氨基酸(Accession Number:KP876058),理论分子量为50.86 ku,理论等电点为8.47,FAD6-b基因的氨基酸序列与已公布的一条中华绒螯蟹Δ6去饱和酶基因的一致性为76%。原核表达载体构建及其表达实验表明,中华绒螯蟹FAD6-b基因成功重组到原核表达载体pCold-TF DNA中,重组质粒pCold TF-fad6b在大肠杆菌BL21(DE3)pLysS中进行表达,经SDS-PAGE电泳分析表明,IPTG诱导后的重组菌出现了单一的蛋白条带,且大小与预期(105.86 ku)一致,可溶性分析显示目的蛋白主要存在于蛋白上清液中。对重组蛋白进行纯化,蛋白纯化液经电泳检测后显示出特异性单一条带,进一步证明了pCold TF-fad6b的成功构建和表达。目的蛋白经Western-blotting检测,结果表明获得的重组蛋白与6×His抗体进行了特异性结合,显示出良好的免疫学活性。
【作者单位】： 上海海洋大学农业部淡水水产种质资源重点实验室;
【关键词】： 中华绒螯蟹 Δ脂肪酸去饱和酶 基因克隆 原核表达
【基金】：国家“八六三”高技术研究发展计划(2012AA10A409-5) 国家自然科学基金(31472287) 上海教委知识服务平台专项(ZF1206) 科技部港澳台科技合作专项(2014DFT30270) 上海市科委优秀学术带头人专项(12XD1402700) 上海市科技兴农重点攻关专项(沪农科2013第5-7号)~~
【分类号】：S917.4
【正文快照】： 脂肪酸去饱和酶(fatty acid desaturase,大困难。FAD6是合成长链多不饱和脂肪酸(longFAD)能够催化饱和脂肪酸(saturated fatty acids)或chain polyunsaturated fatty acids,LC-PUFAs)的限不饱和脂肪酸(unsaturated fatty acids,UFAs)在酰速酶[5],在脂肪酸代谢过程中发挥了重要

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本文编号：761101