绵羊肺炎支原体hlyA基因的表达及活性初步鉴定

发布时间：2017-09-01 17:33

  本文关键词：绵羊肺炎支原体hlyA基因的表达及活性初步鉴定

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【摘要】：绵羊肺炎支原体(Mycoplasma ovipneumoniae,MO)可引起绵羊(Ovis aries)及山羊(Capra hircus)的支原体性肺炎,分布广泛,危害严重。本实验在课题组前期完成MO Y98株基因组测序的基础上,通过基因注释、PCR等获得了该菌株可能的溶血素(hemolysin,hly A)基因;依据大肠杆菌(Escherichia coli)优势密码子对hly A基因进行优化,构建优化后hly A原核表达质粒p ET32a-hly A;将该质粒转入大肠杆菌BL21(DE3)p Lys S中,获得了相应的重组菌株,并对重组菌株进行诱导表达;采用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE)和Western blot对表达的重组蛋白进行鉴定,并经Ni2+金属螯合柱纯化。克隆了MO hly A基因序列(Gen Bank登录号:KT598390),片段大小为375 bp,编码125个氨基酸。优化后密码子适应指数为0.91,目的基因适于在大肠杆菌中表达。重组融合蛋白多以包涵体的形式存在,其相对分子质量约为31.6 k D,与预期大小一致。Western blot结果显示,上清中纯化出的目的蛋白能与一抗发生反应,重组蛋白特异性较好。溶血实验表明,当纯化后蛋白浓度稀释到0.125μg/m L时,溶解红细胞的能力已经下降。该研究结果为后续绵羊肺炎支原体致病性研究提供了基础资料。
【作者单位】： 宁夏大学生命科学学院/西部特色生物资源保护与利用教育部重点实验室;
【关键词】： 绵羊肺炎支原体(MO) 溶血素(hlyA) 密码子优化 溶血活性
【基金】：国家自然科学基金项目(No.31460660;No.31460039和No.31260035)
【分类号】：S858.26
【正文快照】： 绵羊肺炎支原体(Mycoplasma ovipneumoniae,MO)可以引起绵羊(Ovis aries)传染性胸膜肺炎(con-tagious ovine pleuropneumonia),1~3月龄的羔羊极易感染,也可以感染山羊(Capra hircus);主要表现为高热、喘气、咳嗽、贫血、生长发育迟缓、渐进性消瘦和肺间质增生等临床特征(马春

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本文编号：773496