大肠杆菌CFT073中Curli系统重要基因csgF的克

发布时间：2017-09-06 00:21

  本文关键词：大肠杆菌CFT073中Curli系统重要基因csgF的克隆、表达、纯化和结构分析

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【摘要】：【目的】对大肠杆菌CFT073中Culri系统的重要蛋白CsgF进行高效表达,探索其纯化条件和三维结构,为研究Curli生物合成机制提供理论基础。【方法】以大肠杆菌CFT073基因组为模板扩增csgF基因,构建pET28a-csg F(nsp)-N-6His、pET28a-csg F(20-129)-N-6His、pET28a-csg F-C-6His和p ET28a-csg F(nsp)-C-6His等重组质粒,转化到大肠杆菌DH5α并在BL21(DE3)中诱导表达;通过十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定CsgF蛋白在大肠杆菌中的表达情况,用Ni-NTA His Bind Resin和凝胶排阻层析色谱纯化重组蛋白CsgF,SDS-PAGE和Western blotting方法鉴定分析;用Pull down实验研究CsgF与CsgG蛋白的相互作用,同源模建方法分析重组蛋白CsgF的三级结构。【结果】克隆了目的基因csg F,并筛选出稳定CsgF蛋白的条件:50 mmol/L Sodium acetate(pH 5.0)、150 mmol/L NaCl、5%Glyercol;CsgF与CsgG存在相互作用,CsgF三维结构模型显示为(β/α)。【结论】获得了高纯度稳定的CsgF重组蛋白及其三维结构,为进一步研究CsgF结构与功能奠定了基础。
【作者单位】： 中南林业科技大学经济林育种与栽培国家林业局重点实验室;中南林业科技大学湖南省经济林培育与利用协同创新中心;中国科学院生物物理研究所;
【关键词】： 大肠杆菌CFT CsgF 基因克隆 蛋白质表达纯化 凝胶排阻层析色谱
【基金】：国家自然科学基金项目(No.31570682)~~
【分类号】：Q78
【正文快照】： 淀粉样蛋白纤维(Amyloids)是一类错误折叠引发疾病的蛋白聚集体。近年来人们在细菌、真菌、蛛形纲动物、鱼和哺乳动物中发现了功能淀粉样蛋白纤维[1-6]。Curli是一种典型的功能淀粉样纤维,它是大肠杆菌(Escherichia coli)和沙门氏菌(Salmonella spp.)中表达产生的一类附着在细

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1 胡钢清;朱怀球;;致病性大肠杆菌CFT073菌株基因组的再注释[A];中国生物医学工程进展——2007中国生物医学工程联合学术年会论文集（下册）[C];2007年

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本文编号：801069