人二硫键氧化还原酶类似蛋白基因启动子克隆和上游抑制元件分析

发布时间：2017-09-06 21:10

  本文关键词：人二硫键氧化还原酶类似蛋白基因启动子克隆和上游抑制元件分析

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【摘要】：目的克隆Dsb A-L基因启动子,并对其活性进行初步分析。方法以人基因组DNA为模板,利用PCR技术扩增Dsb A-L基因5'端2115bp片段(从翻译起始点ATG上游-2128~-14区域)。将PCR产物插入荧光素酶报告基因载体p GL3-basic。随后,构建5'端系列缺失的报告基因质粒。将构建的一系列质粒转染3T3-L1和HEK 293细胞,检测荧光素酶活性。利用在线软件MAPPER预测转录调控关键序列潜在的转录因子结合位点。通过Real-time PCR比较这些转录因子在肥胖和正常人脂肪组织中的表达。结果成功构建人Dsb A-L启动子报告基因质粒。系列缺失分析表明-2128~-1302区域是影响转录活性的关键序列。MAPPER软件预测此区域可能与一些转录因子结合。比较这些转录因子在肥胖患者和正常人脂肪组织中的表达情况,发现其中NF-κB和FOXO1在肥胖患者中表达显著增加,进一步推测NF-κB和FOXO1可能是人Dsb A-L基因启动子上游的调控抑制因子。结论成功构建人Dsb A-L基因启动子系列缺失质粒,初步分析了其上游可能存在的关键调控元件,为进一步的转录调控研究奠定了基础。
【作者单位】： 上海交通大学附属第六人民医院内分泌代谢科、上海市糖尿病重点实验室、上海市糖尿病研究所、上海市糖尿病临床医学中心;
【关键词】： 二硫键氧化还原酶类似蛋白 转录调控 启动子
【基金】：上海市自然科学基金资助项目(15ZR1431700)
【分类号】：R440
【正文快照】： 二硫键氧化还原酶类似蛋白(disulfide-bond-A oxidoreductase-like protein,Dsb A-L)是近年发现的一种与脂联素多聚体形成有关的重要调节蛋白,在促进脂联素的多聚化,增加胰岛素的敏感性和增加能量代谢方面具有很多有益的作用[1]。Dsb A-L的表达水平和肥胖呈负相关,但是其调节

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本文编号：805454