TMEM176A基因在结直肠癌中的表观遗传学改变及功能机制研究

发布时间：2017-09-12 14:40

  本文关键词：TMEM176A基因在结直肠癌中的表观遗传学改变及功能机制研究

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【摘要】：结直肠癌是世界常见的恶性肿瘤,是癌症致死的主要原因之一,其发病率和死亡率具有地域差异。结直肠癌以前被认为是西方国家的常见恶性肿瘤,然而在亚洲地区,随着饮食习惯和生活方式的改变,结直肠癌已经成为亚洲第三大恶性肿瘤,在中国结直肠癌发病率呈逐年上升趋势,目前仍缺乏早期诊断方法和有效的治疗手段,其主要原因是发病机制不明确。表观遗传可以调控基因的表达,基因启动子区DNA甲基化是目前研究最广泛的表观遗传改变,被认为是肿瘤中普遍发生的分子事件。本研究通过在结直肠癌细胞系和正常结肠粘膜中进行RNA测序分析和验证,鉴定出一批在肿瘤中异常表达的基因。其中TMEM176A在肿瘤中低表达。在8株结直肠癌细胞系中通过RT-PCR、MSP和硫化测序分析,发现TMEM 176A基因的表达受到启动子区甲基化的调控。在96例结直肠癌组织中通过MSP发现,TMEM 176A在结直肠癌中频繁发生甲基化,甲基化率达到53.13%,结合临床病理资料分析发现TMEM 176A的甲基化与肿瘤的转移有关。在27对配对的结直肠癌和癌旁组织通过免疫组化分析发现TMEM176A的表达与TMEM 176A甲基化呈负相关(p0.05)。在不表达TMEM 176A基因的RKO细胞中通过MTT和克隆形成实验发现TMEM 176A基因能抑制肿瘤生长和增殖。通过流式细胞技术分析TMEM 176A能诱导RKO细胞的凋亡,通过transwell实验发现TMEM176A抑制RKO细胞的侵袭和迁移能力。在裸鼠成瘤实验中发现TMEM 176A能抑制肿瘤的生长。为了明确TMEM 176A基因的作用机制,我们对TMEM 176A恢复表达前后的DLD1细胞进行基因表达谱芯片分析,发现TMEM 176A恢复表达后共有394个基因的表达发生改变,其中170个基因表达上调,224个基因表达下调。结论:TMEM 176A基因在结直肠癌中的表达受到启动子区甲基化的调控,TMEM 176A甲基化与结直肠的转移相关。TMEM 176A基因表达诱导结直肠癌细胞的凋亡,抑制结直肠癌的生长和转移。
【关键词】：DNA甲基化 结直肠癌 TMEM176A
【学位授予单位】：南开大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R735.34
【目录】：

• 中文摘要4-5
• Abstract5-8
• 缩略词表8-9
• 第一章 引言9-20
• 第二章 筛选在结直肠癌中表达改变的基因并验证20-29
• 第一节 实验材料20-21
• 第二节 实验方法21-24
• 第三节 实验结果24-26
• 第四节 讨论26-28
• 第五节 小结28-29
• 第三章 TMEM176A在结直肠癌中的表达受启动子区甲基化的调控29-41
• 第一节 实验材料29-31
• 第二节 实验方法31-37
• 第三节 实验结果37-39
• 第四节 讨论39-40
• 第五节 小结40-41
• 第四章 TMEM176A在结直肠癌中的功能研究41-50
• 第一节 实验材料41-42
• 第二节 实验方法42-44
• 第三节 实验结果44-48
• 第四节 讨论48-49
• 第五节 小结49-50
• 第五章 TMEM176A在结直肠癌中的作用机制探索50-62
• 第一节 实验材料50-51
• 第二节 实验方法51-52
• 第三节 实验结果52-60
• 第四节 讨论60-61
• 第五节 小结61-62
• 第六章 总结62-63
• 参考文献63-71
• 致谢71-72
• 个人简历72

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本文编号：837858