双荧光素酶报告基因系统鉴定has-miR-577和has-miR-583对FGF-21基因的靶向调控

发布时间：2017-09-19 04:43

  本文关键词：双荧光素酶报告基因系统鉴定has-miR-577和has-miR-583对FGF-21基因的靶向调控

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【摘要】：目的通过构建成纤维细胞生长因子-21基因(fibroblast growth factor 21,FGF-21)荧光素酶报告基因载体,观察has-miR-577和has-miR-583对FGF-21基因的靶向调控。方法利用生物学信息网站对has-miR-577和has-miR-583靶向结合FGF-21 3′UTR区的位点进行分析,设计合成包含与has-miR-577和has-miR-583结合序列及其突变序列的FGF-21基因片段,构建野生型(psiCHECK2-FGF-21)和突变型(psiCHECK2-FGF-21-mut)FGF-21双荧光素酶报告基因载体。进行双酶切电泳和测序鉴定后,FGF-21野生型与突变型双荧光素酶报告基因载体分别+〔hsa-miR-577模拟物、hsa-miR-583模拟物和miR无义序列阴性对照(miR negative control,miR-NC)〕转染293T细胞,检测荧光素酶活性,观察has-miR-577和has-miR-583对FGF-21表达的影响。结果双酶切电泳和测序结果显示,野生型(psiCHECK2-FGF-21)和突变型(psiCHECK2-FGF-21-mut)基因载体片段大小、序列结果与实验预期一致,载体构建成功。has-miR-577和has-miR-583可抑制野生型FGF-21载体的荧光表达(P0.05),而对突变型FGF-21载体的荧光表达无抑制作用。结论 has-miR-577和has-miR-583可以靶向调控FGF-21的表达。
【作者单位】： 四川大学华西医院实验医学科/临床检验医学研究中心;四川大学华西医院内分泌代谢科;
【关键词】： has-miR- has-miR- 双荧光素酶报告基因 FGF-
【基金】：国家自然科学基金青年项目(No.81501800)资助
【分类号】：R440
【正文快照】： 成纤维细胞生长因子-21(fibroblast growthfactor 21,FGF-21)是FGF家族成员之一,由肝脏分泌,与糖脂代谢密切相关,研究显示,FGF-21具有有治疗糖尿病的潜能[1]。微小RNA(microRNA,miRNA)是一组长度在17~25个核苷酸的非编码小RNA,本课题组通过生物学软件发现,FGF-213′UTR区存在，

本文编号：879565