木薯内参照基因LAM2定性PCR和定量PCR分析

发布时间：2017-09-25 05:10

  本文关键词：木薯内参照基因LAM2定性PCR和定量PCR分析

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【摘要】：在转基因植物及其产品的成分检测中,内参照基因(endogenous reference gene)起着重要的作用,木薯内参照基因的研究是转基因木薯成分定性PCR和定量PCR检测的基础。本研究选择木薯的亚麻苦苷酶(linamarase,LAM)和Polyubiquitin(PUBQ)基因为研究对象,运用定性PCR的方法在22种木薯的不同品种中进行稳定性分析,在12种大戟科其它植物、20种非大戟科植物及五类主要转基因作物的混合样品(玉米,大豆,水稻,棉花和油菜)中对LAM2和PUBQ1定性PCR引物进行特异性检测分析及灵敏度检测分析。结果显示:LAM2和PUBQ1引物在木薯的不同品种中均能得到稳定性扩增;在12种大戟科其它植物、20种非大戟科植物能够进行特异性扩增,没有发现非特异性扩增产物出现;LAM2在五类主要转基因作物的混合样品(玉米,大豆,水稻,棉花和油菜)中也没有非特异性扩增产物出现,而PUBQ1在五类主要转基因作物的混合样品(玉米,大豆,水稻,棉花和油菜)中却有很多的非特异性扩增产物出现。灵敏度检测发现定性PCR LAM2检测方法的灵敏度达到质量百分含量0.01%,SYBR GreenⅠ荧光定量PCR检测结果表明LAM2的灵敏度可达到0.001~0.000 1 ng/μL。选择部分品种的PCR扩增产物进行测序,序列分析表明LAM2在不同品种的木薯的基因组DNA均可以扩增到293 bp的核苷酸片段,比对分析表明所获得的木薯不同品种中LAM2 PCR扩增片段的核苷酸序列一致没有发现变异位点。研究结果表明LAM2引物扩增系统初步符合内参照基因的种内一致性,稳定性,种间特异性的特点,灵敏度检测的要求可应用于转基因木薯成分定性和定量PCR检测。
【作者单位】： 中国热带农业科学院热带生物技术研究所农业部热带作物生物技术与遗传资源利用重点实验室;农业部转基因植物及植物用微生物环境安全监督检验测试中心;中国热带农业科学院科技信息研究所;
【关键词】： 木薯 内参照基因 LAM PUBQ PCR
【基金】：科技部国际科技合作专项(2013DFA32020) 海南省重大科技项目子课题(ZDZX2013023-1) 中央级公益性科研院所基本科研业务费项目(ITBB2015RC01)共同资助
【分类号】：S533
【正文快照】： Establishment of Qualitative Polymerase Chain Reaction(PCR)and Quanti-tative PCR methods for Endogenous Reference Gene LAM2 in TransgenicCassavaLi Meiying1,2Liu Enping3Xia Qiyu1,2Guo Yunling1,2Yi Xiaoping1,2*Guo Anping1,2*1 Institute of Tropical Bioscien

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本文编号：915527