单增李斯特菌三重实时荧光PCR检测的建立及其毒力基因在分离菌株中分布

发布时间：2017-09-26 07:30

  本文关键词：单增李斯特菌三重实时荧光PCR检测的建立及其毒力基因在分离菌株中分布

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【摘要】：目的建立同时检测单增李斯特菌(Listeria monocytogenes,Lm)溶血素基因hlyA、内化素基因inlA和磷脂酶C基因plcB的TaqMan-MGB三重实时荧光PCR检测方法,并对101株单增李斯特菌的hlyA、inlA和plcB基因进行了检测,分析3个毒力基因在多位点序列分型(Multilocus sequence typing,MLST)聚类群组中的分布情况。方法根据单增李斯特菌毒力基因hlyA、inlA和plcB的保守序列设计引物和小沟结合物(minor groove binder,MGB)探针建立三重荧光PCR方法,对其特异性、灵敏度和可重复性进行了测试,并对分离的101株单增李斯特菌进行三重PCR检测。结果建立的三重实时荧光PCR方法特异于单增李斯特菌的检测,重复性良好,组内Ct值变异系数均小于1.5%,灵敏度可达100CFU/mL。对101株单增李斯特菌的hlyA、inlA和plcB的检出率分别为98%、75%和98%。在可被MLST分型的89株菌株中,groupI的30株菌株有20株均缺失inlA基因;groupII的57株菌株中有56株三个基因均检出;groupIII的菌株hlyA、inlA和plcB三个基因均未检出。结论本文建立的三重实时荧光PCR方法能准确、快速、稳定的检测单增李斯特菌,101株单增李斯特菌的hlyA、inlA、plcB三个毒力基因的检出情况与单增李斯特菌的MLST分型聚类有较一致的关系,对分析单增李斯特菌毒力的强弱有重要参考意义。
【作者单位】： 黄埔出入境检验检疫局;广东出入境检验检疫局;中国检验检疫科学研究院;
【关键词】： 单增李斯特菌 TaqMan-MGB三重实时荧光PCR 毒力基因分布 多位点序列分型
【基金】：广东省科技计划项目(No.2013B040402004)资助~~
【分类号】：R440
【正文快照】： (1.Huangpu Entry-Exit Inspection and Quarantine Bureau,Guangzhou510730,China;2.Guangdong Entry-Exit Inspection and Quarantine Bureau,Guangzhou510730,China;3.Chinese Academy of Inspection and Quarantine,Beijing100025,China)Supported by Science and Technol

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本文编号：922248