转基因白桦中GUS基因表达的定量分析

  本文关键词：转基因白桦中GUS基因表达的定量分析，由笔耕文化传播整理发布。

转基因白桦中GUS基因表达的定量分析

植物学报ＣｈｉｎｅｓｅＢｕｌｌｅｔｉｎｏｆＢｏｔａｎｙ

２００９，４４（４）：４８４－４９０，Ⅵ删．ｃｈｉｎｂｕｌｌｂｏｔａｎｙ．ｃｏｍ

ｄｏｉ：１０．３９６９，ｊ．ｉｓｓｎ．１６７４－３４６６．２００９．０４．０１０

－技术方法－

转基因白桦中ＧＵＳ基因表达的定量分析

曾凡锁１ｔ－，钱晶晶１，康君１，王红艳１，王亦洲１，詹亚光１，２＋

１东北林业大学生命科学学院，哈尔滨１５００４０；２东北林业大学林木遗传育种与生物技术教育部鼋点实验室，哈尔滨１

５００４０

摘要

整合拷贝数为１—４个。采用组织化学染色法定性分析不同整合方式转基因白桦植株中Ｇ雠冈的表达。结果表明，１１４＂转基

因植株中有２株出现丁ＧＵＳ基因沉默，其余植株均有不同水平的ＧＵＳ表达。在此基础上应用分光光度法定量分析不同拷贝数的Ｇ￡．，Ｓ转基因白桦中Ｂ．葡萄糖醛酸酶活性。结果表明，在１１个转基因无性系中除２个株系的Ｇ己，Ｓ基因沉默外，其它９个转基因植株中ＧＵＳ酶活力差异明显，但这种差异与ＧＵＳ基因的拷贝数没有必然联系。

关键词

基因表达。ＧＵＳ，整合方式，分光光度法。转基因白桦

以转基因白桦（Ｂｅｔｕｌａｐｌａｔｙｐｈｙｌｌａ）为材料，采用单酶切结合Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交的方法揭示不同转基因植株中Ｇ￡，Ｓ基因的

曾凡锁，钱晶晶，康君，王红艳，王亦洲，詹亚光（２００９）．转基因白桦中ＧＵＳ基因表达的定量分析．植物学报４４，４８４—４９０．

外源ＤＮＡ插入植物基因组中可能导致宿主基因组结构变化，这种变化必将对宿主基因和外源基因的

１

１．１

材料与方法

实验材料

ｐｌａｔｙｐｈｙｌｌａ

表达产生影ｇｌ向（ＫｕｍａｒａｎｄＦｌａｄｕｎｇ，，２００１ｏ因此对于

转基因植物尤其是生长周期较长的树木来说，外源基

因能否稳定地整合和表达至关重要（Ｆｌａｄｕｎｇ，１９９９）。转基因植株中外源基因的表达受到很多因素的影响（Ｃｅｒｖｅｒａ

ｅｔ

转基因白桦（Ｂｅｔｕｌａ

Ｓｕｋ．）为詹亚光等

（２００３）采用农杆菌介导法获得的转抗虫基因自桦。工程菌为根癌农杆菌（Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍｔｕｍｅｆａｃｉｅｎｓ）

ａ１．，２０００）。据报道，与基因整合方式有ＬＢＡ４４０４。为双元载体系统，其中质粒ｐＹＨＹ，长１

３．９

关的影响因素有转基因整合的位点数（拷贝数）

（Ｅｌｍａｙａｎ

Ｔａｎｇｅｔ

ａｎｄＶａｕｃｈｅｒｅｔ，１９９６；Ｍｉｓｈｉｂａｅｔａ１．，２００５；

ｋｂ，携带抗虫基因（蜘蛛杀虫肽基因与Ｂｆ基因Ｃ肽的

嵌合基因，简称ＢＧＴ基因）、ＮＰＴＩＩ和ＧＵＳ基因。转

ａ１．，２００７）、插入位点的基因组成（即位置效

ｅｔａ１．，１９９７；Ｆｉｓｃｈｅｒｅｔ

抗虫基因白桦栽植于东北林业大学白桦强化育种温

室内。

转基因白桦的Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交

应）（Ｉｇｌｅｓｉａｓａ１．，２００８）以及已

经整合的Ｔ－ＤＮＡ的构型改变（Ｓｔａｍ

ｅｔ

ｅｔａ１．，１９９７；Ｚｈａｎｇ

１．２

ｔＵ，ａ

ａ１．，２００８）。

本文以不同整合方式的转基因白桦（Ｂ

ｅ

首先进行转基因植株的Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔ检测。应用改

良的ＣＴＡＢ法（詹亚光和曾凡锁，２００５）提取多糖含量

ｐｌａｔｙｐｈｙｌｌａ）为材料，首先采用组织化学染色法定性分

析不同转基因白桦植株中ＧＵＳ基因的表达。在此基

较多的转基因白桦总ＤＮＡ，采用紫外分光光度法结合琼脂糖凝胶电泳法测定ＤＮＡ纯度和浓度。将２０

ｐｇ

础上，应用分光光度法定量分析不同拷贝数ＧＵＳ基

因的转基因白桦中Ｂ一葡萄糖醛酸酶活性，进而揭示Ｇ￡，Ｓ基因拷贝数对其表达水平的影响。

ＤＮＡ样品以Ｔ－ＤＮＡ中边界具有单切点的限制性内切、酶Ｐｓｔｌ进行酶切过夜，电泳８—１０小时，凝胶经变性

收稿日期：２００８．１０．１５：接受日期：２００８．”．２６

基金项目：国家自然科学基金（ＮＯ．３０８７２０４５）、东北林业大学青年科研基金（Ｎｏ．０７０２８）和东北林业大学本科生创新项目（Ｎｏ２００７００３）

‘通讯作者。Ｅ－ｍａｉｌ：ｙａｇｕａｎｇｚｈａｎ＠１２６．ｃｏｒｎ

。

万方数据

  本文关键词：转基因白桦中GUS基因表达的定量分析，由笔耕文化传播整理发布。